【摘 要】
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引言分娩是一个复杂且相对时间较长的过程,而子宫收缩是决定分娩的重要因素之一,宫缩的异常是导致产程异常、产后出血等重要原因之一。关于如何启动子宫收缩、如何维持和如何调节子宫收缩的机制的研究目前尚不清楚。本课题组在先前的研究中已经发现,子宫平滑肌细胞的自噬分娩临产后被激活。在分娩过程中节律宫缩使子宫平滑肌组织处于阵发性和短暂的缺血缺氧状态,自噬在缺血缺氧过程中起着重要作用。自噬是一种“双刃剑”,能加速
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引言分娩是一个复杂且相对时间较长的过程,而子宫收缩是决定分娩的重要因素之一,宫缩的异常是导致产程异常、产后出血等重要原因之一。关于如何启动子宫收缩、如何维持和如何调节子宫收缩的机制的研究目前尚不清楚。本课题组在先前的研究中已经发现,子宫平滑肌细胞的自噬分娩临产后被激活。在分娩过程中节律宫缩使子宫平滑肌组织处于阵发性和短暂的缺血缺氧状态,自噬在缺血缺氧过程中起着重要作用。自噬是一种“双刃剑”,能加速细胞的新陈代谢,保持细胞的稳定,但是如果发生自噬过度并可能诱发细胞死亡。自噬激活调节信号通路PI3K-AKT-mTOR与AMPK-mTOR信号通路是否在正常产程中的表达发生变化?而异常产程的子宫平滑肌细胞其自噬调控信号通路的表达变化又如何?第一部分未临产、临产及产程延长宫缩乏力人子宫平滑肌组织中自噬现象变化目的:本部分实验校验前期工作,进一步了解当发生产程延长宫缩乏力后子宫平滑肌细胞的自噬现象的变化情况。材料与方法:伦理委员会编号为:No.2018041701。选择人类子宫的平滑肌条,剖宫产时在子宫下段的切口上缘条带切割约5公分×1公分×1公分的子宫肌条。分为:未临产组、临产组及产程延长的宫缩乏力组。获得的子宫平滑肌组织分成三份,其中小部分被制作成电子显微镜的标本,在电子显微镜下观察自噬,剩余组织分两部分-80℃保存留待后续实验。结果:临产组子宫平滑肌细胞中存在自噬小体的增多,而产程延长宫缩乏力组子宫平滑肌细胞自噬小体相对于临产组有所减少。结论:临产子宫平滑肌细胞中存在自噬被激活的现象。第二部分人子宫平滑肌组织中PI3K-AKT-mTOR及AMPK-mTOR信号通路在产程中的变化研究目的:本课题组先前的研究发现子宫平滑肌中在临产后存在自噬增加现象,但自噬调控路径尚不清楚。本节将采用Real Time-PCR、Western Blot等方法检测自噬相关信号通路相关因子在未临产和临产组的表达变化。材料与方法:材料和第一部分相同。将剩余的子宫平滑肌条分为提取组织RNA和提取组织蛋白两部分,采用Real Time-PCR及Western Blot方法检测自噬相关调节的因子,包括mTOR、PI3K、AKT、AMPK在各组织中的mRNA水平和蛋白水平的表达。结果:1.mTOR的mRNA水平和蛋白水平在临产组的子宫平滑肌组织中的表达均明显低于未临产组,上游因子AMPK的mRNA水平和蛋白水平在临产组的表达明显高于未临产组,差异有显著性（P<0.05）。2.PI3K和AKT的mRNA水平和蛋白水平在临产组和未临产组的子宫平滑肌组织中的对比均差异无显著性（P>0.05）。第三部分人子宫平滑肌组织中PI3K-AKT-mTOR及AMPK-mTOR信号通路在产程延长宫缩乏力中的变化研究目的:分娩过程中的三个核心因素为产力、胎儿、产道,影响产程的最主要因素为产力,而产力最重要的为子宫收缩。随着分娩时间延长,发生产程的停滞,其发生主要的原因为宫缩乏力,当宫缩乏力发生时,自噬相关的信号通路是不是发生了改变?本部分将研究自噬相关通路的相关因子在宫缩乏力状态下的表达情况。材料与方法:同第二部分结果:1.mTOR的mRNA表达和蛋白表达在产程延长宫缩乏力组较临产组增高,三个组别间差异有统计学意义,P<0.05;在产程延长宫缩乏力组AMPK的mRNA表达和蛋白表达均低于较临产组,三个组别间差异有统计学意义,P<0.05。2.PI3K的mRNA表达在产程延长宫缩乏力时出现下降,三个组别间差异有统计学意义,P<0.05;AKT的mRNA表达和蛋白水平在产程延长宫缩乏力时的变化与临产、未临产组均未见明显差异,三个组别间差异无统计学意义,P>0.05。全文结论:1.正常产程中子宫平滑肌细胞存在自噬相关的AMPK-mTOR的信号通路的激活,其可能介导了自噬的激活2.正常产程中子宫平滑肌细胞自噬相关PI3K-AKT-mTOR通路未被激活3.子宫平滑肌细胞自噬相关AMPK-mTOR的信号通路在发生产程延长宫缩乏力时被抑制,自噬程度受到抑制。4.产程延长宫缩乏力时子宫平滑肌细胞可能存在自噬相关、与葡萄糖转运糖代谢相关的PI3K通路被抑制
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