帕曲星制备工艺的初步研究

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链霉菌SIPI-A.2020是本实验室分离保藏的一株可能产生帕曲星的放线菌,本文对此菌株培养与发酵、抗菌活性物质的分离纯化及其结构的验证进行了比较系统的研究。对SIPI-A.2020发酵液进行生物活性检测和HPLC-MS分析,初步确定其中两个活性物质X和Y分别为帕曲星B和帕曲星A。确定了从发酵液中分离纯化X和Y的工艺路线:对发酵液进行预处理,去除大量的极性杂质和色素;再通过吸附解吸实验确定合适的吸附树脂,并对该树脂的层析参数进行考察,确立了合适的吸附洗脱条件;最后通过结晶析出获得X和Y成品,其HPLC纯度分别为96.3%和95.6%。进一步UV、MS、NMR等分析,验证其为帕曲星B和帕曲星A。将SIPI-A.2020进行自然分离,得到一株稳定高产菌株SIPI-A.2020 (21-4),并将其作为出发菌株进行紫外诱变,得到高产菌株SIPI-A.20206017、SIPI-A.20209002、SIPI-A.20209011、SIPI-A.20209014,发酵效价比诱变前均提高50%左右。对SIPI-A.20209011的培养基和培养条件进行优化。考察了碳源、氮源和前体等对帕曲星发酵的影响,得到一组较适宜的培养基配方;然后对培养基初始pH值、摇瓶装量、培养温度、接种量等培养条件进行了考察,初步确立了较合适的培养条件。通过菌种选育与发酵条件优化,SIPI-A.2020主要产物X的发酵效价提高89.3%,达到1024μg/mL (Y与X的含量比约为1:2)。
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