论文部分内容阅读
目的:食管癌在河北省南部及河南省北部的发病率居世界之首，对人类的健康和生命构成严重的威胁。在世界范围内食管癌病死率位于恶性肿瘤的第七位，其发病率在我国恶性肿瘤中居第四位。因此，对食管癌的发病机制进行深入的研究有助于食管癌的早发现、早诊断、早治疗，同时对评估食管癌患者的预后具有深远的理论和临床意义。已有研究表明，食管癌是一种多基因遗传性疾病，且受环境因素的影响较大，其发生是多种癌基因激活与抑癌基因失活长期相互作用的结果。金属硫蛋白(MTs)是一类低分子量、富含半胱氨酸、广泛存在于人和哺乳动物中的小金属结合蛋白质。迄今为止已经发现四个亚型的MT(MT-1-4),其中MT-2A是MT-Ⅱ亚型中唯一一个具有生物学作用的蛋白质,研究表明，食管组织中MT-2A的表达能促进组织向不典型增生-食管癌序列的发展，且MT-2A高表达的食管鳞状细胞癌患者的淋巴结转移率及远处转移率明显的高于低表达的患者，因而可以判断MT-2A在很大程度上起到了癌基因的作用。食管癌中MT各亚型呈现不同的高表达状态，这一高表达状态可能与基因突变有关。我们前期研究发现10例食管鳞癌癌组织及其边缘正常组织中MT-2A外显子1上游区域存在一个A/G多态位点，为研究食管癌及其正常组织中MT-2A位点多态性对mRNA含量的影响，本课题应用逆转录PCR(reverse transcription PCR, RT-PCR)技术，检测新鲜食管癌标本及其对应癌旁“正常”食管粘膜组织中MT-2A基因mRNA表达情况，旨在研究多态位点为G的标本中MT-2A基因mRNA表达情况与相应位点为A的标本中MT-2A基因mRNA表达情况之间的关系，及其与各临床病理参数之间的关系。方法:1取河北医科大学第四医院东院胸外科于2010年5月-2011年12月手术切除的新鲜食管癌组织及其癌旁“正常”组织40例，其中10例患者食管癌组织及其癌旁“正常”组织中发现MT-2A外显子1上游区域存在一个A/G多态位点。全组男性24例，女性16例，年龄范围在55-73岁，中位年龄为65岁，从手术切除的标本中获取食管癌组织，取距食管癌组织外缘5cm以上“正常”粘膜组织作为正常对照组。采集过程需在低温环境下进行，采集的组织标号后放入液氮中保存，待其术后病理证实为鳞状细胞癌后方可作为实验标本。2把所采取的实验标本切割成大小约0.5×0.5×0.5mm的组织做成蜡块。采用HE染色的方法对所得蜡块进行鉴定，以保证采集食管癌旁组织中不含有癌细胞。3切割部分标本行HE染色后，从剩余标本提取RNA,应用RT-PCR技术对MT-2AmRNA的表达进行研究。4对所得的实验数据进行统计学分析。计量资料应用均数±标准差表示,应用t检验进行统计学分析,分析多态位点为G的标本中MT-2A基因mRNA表达情况与相应位点为A的标本中MT-2A基因mRNA表达情况之间的关系，及其与各临床病理参数之间的关系。P＜0.05,有统计学意义。结果:1实验所取标本均经HE染色，证实食管癌组织均为食管鳞状细胞癌，癌旁“正常”粘膜组织中均不含有食管癌细胞。2组织总RNA D260nm/D280nm等于1.9，这表明组织总RNA的浓度较高，可用来进行RT-PCR扩增。提取组织总RNA行琼脂糖凝胶电泳后，显示3条清晰的条带，分别为28S、18S、5S,说明提取组织总RNA无明显降解，完整性较好。3MT-2A mRNA在多态位点为G的标本中食管癌旁“正常”粘膜组织与相应位点为A的标本中食管癌旁“正常”粘膜组织表达情况统计学分析P＞0.05(P=0.80)，两者之间无统计学意义。4MT-2A mRNA在相应位点为A的标本中食管癌组织与其癌旁“正常”粘膜组织表达情况统计学分析P＞0.05(P=0.08),两者之间无统计学意义。5MT-2A mRNA在多态位点为G的标本中食管癌组织与其癌旁“正常”粘膜组织表达情况统计学分析P＜0.05(P=0.03),两者之间有统计学意义。6MT-2A mRNA在多态位点为G的标本中食管癌组织与相应位点为A的标本中食管癌组织表达情况统计学分析P＜0.05(P=0.04),两者之间有统计学意义。7多态性位点为G的标本中食管癌组织中的MT-2A mRNA含量与患者的性别、肿瘤部位、病理分期、组织分化程度及淋巴结转移均无关。（P均＞0.05）结论:1多态性位点为G的标本中食管癌旁“正常”粘膜组织与相应位点为A的标本中食管癌旁“正常”组织的MT-2A mRNA表达量无统计学意义。即多态性位点为G的标本中食管癌旁“正常”组织的MT-2AmRNA与相应位点为A的食管癌旁“正常”组织的MT-2A mRNA的含量无差异。2相应位点为A的标本中食管癌组织与其癌旁“正常”粘膜组织的MT-2A mRNA表达量无统计学意义。即相应位点为A的标本中食管癌组织MT-2A mRNA与其癌旁“正常”组织中MT-2AmRNA的含量无差异。3多态性位点为G的标本中食管癌组织与其癌旁“正常”粘膜组织MT-2A mRNA的表达量有统计学意义。即多态性位点为G的标本中食管癌组织MT-2A mRNA的量高于其癌旁正常粘膜组织的MT-2A mRNA的量。4多态性位点为G的标本中食管癌组织与相应位点为A的标本中食管癌组织的MT-2A mRNA表达量有统计学意义。即多态性位点为G的标本中食管癌组织MT-2AmRNA的量高于相应位点为A的标本中食管癌组织的MT-2AmRNA的量，即此多态位点G对食管癌的发生有高度相关性。