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本实验室对鸡MHC Ⅰ(BF)、β2m、TCR和CD4进行了一系列研究,尤其是对BF2复等位基因和鸡β2m蛋白的二级结构及其复合体结合禽流感病毒多肽进行了研究。为了推进BF2-多肽-TCR以及CD8组装体的精细结构及其呈递病毒抗原多肽的研究,本文克隆了三黄鸡CD8α和CD8β链的cDNA,表达和纯化了其重组蛋白(rChCD8α/β),并分别制备了其多克隆抗体。
首先从三黄鸡cDNA文库克隆了CD8α和CD8β胞外区cDNA,构建了pQE30/ChCD8α/β原核表达系。经诱导表达、亲和层析,SDS-PAGE分析,获得了纯化的rChCDSα/β。将rChCD80α/β分别免疫Balb/c小鼠制备了其多克隆抗体。结果表明克隆的三黄鸡CD8α胞外区(ChCD8α)长483bp。编码161个氨基酸。可在E.coli JM109中高效表达,rChCD8α分子量为24.0kD,表达量占菌体蛋白量的25.0%;鼠抗rChCD8α的ELISA效价为1:1,024,000。ChCD8β长447bp,编码149个氨基酸。SDS-PAGE结果显示rChCD8β分子量为18.5kD,表达量占菌体蛋白量的20.0%;鼠抗rChCD8β多克隆抗体ELISA效价为1:64,000。
本文为进一步研究BF2-TCR-CD8α/β的结构与功能提供了蛋白与抗体同时为建立鸡CTL表位测定系统打下了基础。