布氏艾美耳球虫保定早熟株的选育及生物学特性研究

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鸡球虫病呈世界性分布,在鸡艾美耳球虫7个种中,布氏艾美耳球虫属于中等致病力的一种,主要是引起鸡的直肠球虫病,特征性病变是局限于直肠和泄殖腔的出血性炎症反应,严重时可上升至小肠后段。本论文以布氏艾美耳球虫保定株为研究对象,对其生物学特性进行研究,并经过早熟选育法获得弱毒虫株,并作免疫原性和遗传稳定性研究,探讨其预防布氏艾美耳球虫病的效果,为球虫弱毒活疫苗的研制奠定基础。  本研究第一部分利用琼脂薄膜法球虫单卵囊分离技术,从含混合球虫卵囊的新鲜粪便中分离布氏艾美耳球虫卵囊,纯化后进行增殖,对其部分生物学特性进行研究。结果布氏艾美耳球虫保定株的潜隐期为125 h,测得其卵囊大小为26.1μm×21.3μm,形状指数为1.22,病变部位主要在直肠、泄殖腔和小肠后段,特征性病变是肠黏膜层有出血纹及血色内容物;应用特异PCR方法对获得的卵囊进行进一步分子鉴定,结果确认所分离、纯化的球虫卵囊为布氏艾美耳球虫纯种,没有被其它种类的球虫卵囊污染。  第二部分按照Jeffers建立的球虫早熟株选育方法对布氏艾美耳球虫保定株作20代的早熟选育,获得布氏艾美耳球虫早熟株,与保定亲本虫株相比,其潜隐期缩短了37 h,即由125 h减至88 h;该早熟株卵囊大小为24.4μm×20.0μm,形状指数为1.22;并且布氏艾美耳球虫早熟株繁殖力下降,致病性降低;经过5代非选择性传代证明该早熟株的弱毒特性和早熟特性没有发生改变,说明其具有遗传稳定性;该早熟株对抗球虫药物克球素、地克珠利、磺胺喹嗯啉和尼卡巴嗪高度敏感,敏感性与保定亲本株一致;用布氏艾美耳球虫早熟株免疫无球虫感染健康鸡,免疫后21 d能抵抗1.0×105个布氏艾美耳球虫强毒孢子化卵囊的攻击,说明早熟株仍然保持良好的免疫原性。
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