论文部分内容阅读
研究目的探究抗Xa活性检测与利伐沙班血药浓度的相关性,建立相应监测范围,为临床合理使用提供参考。通过检测抗Xa活性,评估经桡动脉穿刺入路行诊断性冠状动脉造影并且有可能进行或不进行后续PCI的患者中,依诺肝素分阶段抗凝方案的可行性。为了能够对临床提供可靠的检测数据,本研究对血栓调节蛋白(TM)、凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT),还有纤溶酶-纤溶酶抑制物复合物(PIC)、组织型纤溶酶原抑制物复合物(tPAI-C)测定仪器的临床性能进行了验证评估。研究方法从中国医学科学院北京协和医院血管外科招募与纳入标准、排除标准皆相符的的汉族深静脉血栓病人为本次研究的研究对象,研究对象的服药剂量由临床医师基于各自的临床适应症、肝肾功能等实际临床情况进行制定,同时嘱利伐沙班需与饭同服。用于建立药代动力学模型的患者人群,入选标准限定为之前未服用利伐沙班的患者,在用药前(0h)以及用药后1、2、3、8、24h采集静脉血标本;用于建立抗Xa活性监测范围的人群,入选标准需限定服用利伐沙班7天以上的患者,于用药前和用药后2h采集患者静脉血标本。利伐沙班血药浓度采用金标准UPLC-MS/MS方法进行测定,凝血酶原时间(英文全称为“prothrombin time”,简写为PT)、抗Xa因子活性,还有活化部分凝血活酶时间(全称为“activated partial thromboplastin time”,简写为“APTT”)采用Sysmex CS5100全自动凝血分析仪进行测定,其中抗Xa因子活性同时采用Stago STA-R EVlution全自动凝血分析仪进行测定。从中国医学科学院北京协和医院心内科招募符合入排标准的计划经桡动脉行择期冠状动脉造影且进行或不进行后续PCI患者,根据给药剂量、造影术后是否进行后续PCI分为标准剂量组、高剂量组、分次给药PCI组及单次给药PCI组,分别在不同时间点采集样本检测抗Xa活性。按照美国临床实验室标准化协会(简称为CLSI)制定的文件EP5-A2与EP6-A,还有卫生部《临床血液学检验常规项目分析质量要求WS/T 406-2012》标准,选取2016年2月至5月期间来我院体检的200例健康受试者及12例DIC患者样本,对测定TM、TAT、PIC及tPAI-C的高敏化学发光免疫分析仪的不精密度、携带污染率、线性范围、参考范围、样本稳定性及抗干扰能力进行了分析。研究结果相关分析结果显示,PT、APTT以及两种试剂检测得到的抗Xa因子活性与利伐沙班血药浓度的相关系数分别为0.814(P<0.001)、0.801(P<0.001)、0.980(Stago试剂,P<0.001)、0.983(Hyphen试剂,P<0.001)。其中抗Xa因子活性与血药浓度的相关性良好,优于PT、APTT与血药浓度的相关性。15mg bid、10mg bid、20mg qd、15mg qd和1Omg qd剂量组的抗Xa因子活性(Stago试剂举例)平均谷值分别为168.1、65.5、29.3、28.5、26.2ng/mL;平均峰值分别为 262.0、272.1、299.2、326.1、222.2 ng/mL。对标准剂量组和高剂量组进行比较发现,给药前(V1-0)两组抗Xa活性检测结果的差异无统计学意义,但在给药后10min(V1-1)及给药后90min(V1-2),高剂量组的抗Xa活性检测结果高于标准剂量组,差异具有统计学意义。分次给药PCI组与单次给药PCI组比较中,给药前两组抗Xa活性检测结果无统计学差异。给药后10min(V1-1)及PCI开始前(V2-0),单次给药PCI组的抗Xa活性检测结果高于分次给药PCI组,差异具有统计学差异。首次给药90min(V1-2)、PCI开始后10 min(V2-1),分次给药PCI组的抗Xa结果高于单次给药PCI组,差异具有统计学意义,在PCI结束后(V2-2)两组抗Xa检测结果的差异无统计学意义。TM、TAT、PIC及tPAI-C的批内批间不精密度均小于5%,携带污染率均小于1%。线性验证的相关系数为0.998～0.999之间,均≥0.99。说明书提供的TM、TAT及PIC的参考范围适用于本实验室,tPAI-C的参考范围需要对性别进行分组,30例男性及30例女性中分别有18例、6例健康受试者的检测结果超出参考范围,故需要重新建立参考范围。稳定性试验显示,TM在室温环境下可稳定2天,其余环境下稳定性较差;TAT在4℃及-20℃环境下较稳定,可稳定保存5天,但在室温环境下稳定性较差,呈降低趋势。PIC及tPAI-C在三种温度环境下基本可稳定保存3天,其后呈不同程度的增高或降低。抗干扰试验显示,高至510mg/dL浓度的HGB、1490FTU浓度的甘油三脂、21.1mg/dL浓度的结合胆红素及21.1mg/dL浓度的游离胆红素对TM、TAT、PIC及tPAI-C无干扰。研究结论抗Xa活性检测与利伐沙班血药浓度具有良好的相关性,必要时可用于监测利伐沙班抗凝疗效。虽然研究结果显示PT、APTT与利伐沙班血药浓度线性较差,灵敏度较低,但在峰值浓度时PT、APTT也存在一定程度的延长,对于不能开展抗Xa因子活性检测的实验室,建议实验室建立自己的PT、APTT峰值安全监测范围,以备不时之需。从抗Xa活性检测结果分析,对于只行造影术的患者,标准剂量依诺肝素(0.5 mg/kg)的抗凝作用足以,若患者需要进行PCI即造影后随即进行PCI术,为了保证PCI手术的顺利进行,可在PCI术前追加0.25 mg/kg剂量的依诺肝素。TM、TAT、PIC及tPAI-C采用高敏化学发光免疫分析技术测定的不精密度、携带污染率、线性、抗干扰能力等性能参数满足临床检测。