丝氨酸蛋白酶是一个种类极其庞大的酶家族,它们的应用范围也非常广泛,广泛用于食品、营养品、药品、化妆品、洗涤剂以及皮革和纺织工业领域,在废物处理方面也有一定的应用。丝氨酸蛋白酶(Serine protease,Sp)是一类以丝氨酸为活性中心的重要的蛋白水解酶,其广泛存在于动物、植物、细菌、病毒、真菌中,它们通过对酶原的激活和抑制的调节,发挥着多种多样的生理和病理功能。比如在植物胚胎发育、组织重建、细胞分化,动物血管形成,病原体感染及宿主的防御,组织降解及细胞衰老死亡等都扮演着重要的角色。微生物来源的丝氨酸蛋白酶由于具有生产成本低、稳定性好、产量高及经济可行性等优点而得以广泛应用。其中嗜热微生物来源的丝氨酸蛋白酶因具有高稳定性而引起人们的重视。本文从嗜热网球菌基因组中克隆出蛋白酶基因dt1871,用PCR的方法扩增基因,用限制性内切酶对目的基因进行切割、用DNA连接酶进行过夜连接等,成功构建重组质粒,并将构建好的重组质粒转化入大肠杆菌中进行外源表达,由于蛋白质在折叠过程中出现错误折叠使蛋白在表达过程中形成不溶性的包涵体,对包涵体进行变性复性处理获得可溶性表达的蛋白酶,通过对表达菌株的筛选,目的蛋白在大肠杆菌Transetta(DE3)中的表达效果较好,因此选用该菌株表达目的蛋白,通过对温度以及诱导剂浓度进行优化,该蛋白酶最适温度为80℃,最适pH为9.0,是一种碱性蛋白酶,80℃热处理酶半衰期为4小时低,说明该酶具备较好的热稳定性。