心脑血管疾病是现代社会严重危害人类身心健康和生命安全的多发病和常见病，发病率高，危害性大，死亡率已经超过癌症，成为人类的“第一健康杀手”。心脑血管疾病是心血管病和脑血管病的总称，主要包括：高血压、冠心病、脑出血、脑梗塞。目前，国际上冠状动脉支架的植入占全部冠心病介入治疗的70％，植入支架后，可有效地解决冠状动脉的狭窄和闭塞，但随之也带来了许多弊端。由于异物的植入，容易引起排斥、过敏反应，增强了感染的机会，最为严重的是支架的植入会引起血管内膜的损伤，使血小板凝聚，形成血栓，造成再狭窄。据报道冠脉内支架放置术再狭窄率可达20％。因此，寻找到一种能有效预防再狭窄的药物作为支架的涂层药物是冠心病治疗的重要任务。目前临床上防止支架植入后血栓形成的主要方法是全身应用抗凝/溶栓药物治疗，该类治疗方法需较长期用药，易导致出血等并发症，患者经济负担重。另一类方法就是在支架涂层抗凝药物，如肝素，目前国外已有产品用于临床，国内未见研制该类产品报道。由于在分子或细胞水平上评价化合物的生物活性,具有速度快，消耗量小，能在较短时间内检测药物的生物活性等特点,本文通过蚓激酶对内皮细胞的作用研究来评价是否能应用于支架涂层药物。 蚓激酶的药理作用是多方面的，可以激活抗凝系统，溶解纤维蛋白，抑制血小板聚集，可以改善微循环；提高细胞t-pA含量。而对于蚓激酶对细胞作用的研究报道很少。因此，分离纯化出蚓激酶,检测蚓激酶对内皮细胞的作用以及从细胞水平上探讨其在细胞生长增殖过程中的作用,这些均为蚓激酶能否作为支架涂层药物来预防和治疗ISR提供了理论基础。 本实验用赤子爱胜蚯蚓为原料制备的粗酶粉作为上样样品，酶在pH4～11时是稳定的，在不同的pH条件下使用离子交换是一条可行的道路。以粗酶粉为原料，经过pH5.0时的DEAE-C层析、超滤、pH6.5时的DEAE-C层析后得到一种电泳纯组分。并在洗脱的过程中对各个时间段收集的酶的活力以及蛋白含量进行了跟踪检测。经过两次层析得到的电泳纯品(100mmol/Lnacl-PBS洗脱峰)具有较高的比活,达到600IU/mg以上，可以用于下一步试验。将该酶片断简称为EFE-a。将百奥蚓激酶胶囊简称为EFE-b。在对酶的pH稳定性发现EFE-a具有较好的pH稳定性，在pH4～11，活力基本保持不变；在对酶的热稳定性试验中发现： EFE-a在20 OC～50 OC时活力基本保持不变,而在60 OC时活力稍有下降,大于70 OC时1个小时活力完全丧失。试验表明，该酶不是金属酶,对体外血块的溶解作用在同等条件下优于尿激酶。在体外血小板聚集试验表明：9μg的EFE-a与对照组相比，聚集抑制率可达76.15％。9μg、7.5μg、6μg、4.5μg, 、3μg的EFE-a与对照相比均具有显著抑制血小板聚集的作用(P<0.01.) 。 在体外培养ECV304细胞的作用试验中，通过显微镜下观察EFE-a和EFE-b对内皮细胞的作用，发现经过正常培养的细胞成多角形；经EFE-a和EFE-b孵育24小时后的细胞均大部分变圆，置死；EFE-a对细胞的溶杀作用呈剂量依赖性；高剂量的EFE-a对细胞具有溶杀活性，这与蚓激酶水解细胞中的某些结构蛋白，破坏细胞结构的完整性有关；而EFE-b呈单个游离状态多呈球形，这与EFE-b水解胞外基质有关，使细胞脱离了胞外基质的连接和支撑。