第一部分心绞痛患者血浆抵抗素水平的研究研究背景：抵抗素是一种新的脂肪细胞因子，最初研究表明抵抗素可能是联系肥胖、胰岛素抵抗和2型糖尿病的细胞因子。但啮齿类动物抵抗素主要由脂肪细胞分泌，而人类抵抗素主要是由单核-巨噬细胞分泌，研究证实在小鼠和人的动脉粥样硬化斑块存在抵抗素蛋白，且抵抗素可能在动脉粥样硬化形成发展中具有潜在作用。抵抗素水平在冠心病患者显著升高，是动脉粥样硬化的一个独立的炎症标志物。但不同的心绞痛患者间，抵抗素水平是否存在变化国内尚无报道。目的：观察不同心绞痛患者循环抵抗素水平的变化，以及循环抵抗素水平与代谢指标、炎症指标等之间的相关性。方法：序贯入选因疑诊冠心病而在阜外医院行择期冠脉造影检查的患者114例，根据造影结果及临床表现，将研究对象分为不稳定心绞痛组(UAP，46例)、稳定心绞痛组(SAP，37例)和对照组(31例)。收集患者一般临床资料及生化指标，免疫比浊法检测高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平；放免法检测血清胰岛素和内皮素-1(ET-1)水平；ELISA法检测不同人群血浆抵抗素、大内皮素的水平。结果：UAP组血浆抵抗素水平(12.09(8.40，18.08)ng／ml)显著高于SAP组(9.04(7.09，11.44)ng／ml)(P＜0.05)，以及对照组(8.71(6.58，11.56)ng／ml)(p＜0.001)；而SAP组和对照组之间无明显差异。我们证实了抵抗素与年龄(R~2=0.06，P=0.009)、白细胞计数(R~2=0.05，P=0.013)以及hs-CRP(R~2=0.05，P=0.014)之间呈正相关，而且还发现血浆抵抗素与大内皮素(R~2=0.05，P=0.013)以及FT-1(R~2=0.07，P=0.005)水平呈正相关。在校正年龄、性别和腰围后，除了大内皮素外，这些相关性仍存在。结论：血浆抵抗素水平在冠心病患者、尤其是UAP患者显著升高，而且与白细胞计数、hs-CRP及ET-1水平独立正相关。提示抵抗素可能通过影响系统的炎症反应和内皮活化而参与冠心病的发生发展。第二部分CRP对人单核细胞抵抗素表达影响的实验研究背景：动脉粥样硬化是一种慢性炎症过程，抵抗素是一种新的脂肪细胞因子，既往被认为与胰岛素抵抗相关。但近几年研究表明，抵抗素参与炎症反应和动脉粥样硬化的病理生理过程，且是动脉粥样硬化的一个独立的炎症标志物。C反应蛋白(CRP)是冠心病的一个重要的危险因素，同时还能调控参与动脉粥样硬化的多种基因的表达。CRP不仅是一个炎症标志物，还有可能直接参与炎症反应和动脉粥样硬化过程。多项研究表明循环抵抗素水平与CRP水平呈正相关，但CRP与抵抗素的因果关系如何，是系统低度炎症反应引起抵抗素分泌?还是抵抗素同IL-6等类似、是CRP的另一诱导因子，目前无相关的研究。目的：本部分主要研究CRP对培养的人外周血单核细胞抵抗素mRNA和蛋白表达的影响。方法：采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞。在培养基中分别加入不同浓度的CRP(0，5，10，25，50μg／ml)，培养24小时，以检测CRP影响抵抗素表达的剂量效应。另一组实验检测CRP影响抵抗素表达的时间效应，即在培养基中加入25μg／ml CRP，分别培养不同的时间(0，3，6，12，24小时)。分别用real time PCR和ELISA方法检测单核细胞抵抗素mRNA表达及细胞培养液中抵抗素的浓度。结果：CRP呈剂量依赖性诱导抵抗素mRNA表达，与空白对照组抵抗素mRNA水平相比，5μg／mlCRP刺激单核细胞24h，抵抗素mRNA表达显著增加2.1倍(p＜0.05)。当CRP浓度为25μg／ml，该效应最大，为9.8倍(p＜0.05)。对照组培养基中的抵抗素水平很低，甚至检测不出。但是与5μg／ml CRP孵育后，培养基中抵抗素水平为0.35±0.01ng／ml(p＜0.05)。当CRP为50μg／ml时，这种刺激效应最大，抵抗素是水平为1.19±0.30ng／ml(p＜0.05)。CRP诱导抵抗素的表达也呈时间依赖性。25μg／mLCRP与人单核细胞孵育不同的时间发现，抵抗素m RNA在CRP刺激3小时后即开始明显升高，为基础水平的2.9倍(P＜0.05)，并随刺激的时间延长而进一步增加，于24小时达峰值(10倍，P＜0.05)。而培养基中的抵抗素蛋白水平经CRP刺激3小时后仍未检测出，6小时后，抵抗素蛋白水平才显著升高，为0.21±0.12ng／ml(p＜0.05)，也于24小时达峰值，为0.89±0.16ng／ml(p＜0.05)。结论：促炎因子CRP可呈剂量依赖性和时间依赖性地诱导人单核细胞抵抗素mRNA和蛋白表达，可能是急性冠状动脉综合征患者循环中抵抗素水平升高的机制之一，也进一步证实了CRP在血管炎症和动脉粥样硬化的病理生理过程中的直接作用。第三部分他汀类药物对CRP诱导的抵抗素表达的调节作用背景：HMG-CoA还原酶抑制剂(他汀类药物)广泛用于心血管疾病的治疗，并能显著降低心血管相关的发病率和死亡率。近几年研究发现，他汀类药物除了传统的降脂外，还具有独立于降脂作用以外的抗炎作用。动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病。抵抗素是一种新的脂肪细胞因子，也参与炎症反应和动脉粥样硬化的病理生理过程。本研究第二部分结果表明CRP可呈剂量依赖性和时间依赖性地诱导人单核细胞抵抗素mRNA和蛋白表达。他汀类药物是否能影响CRP诱导的单核细胞抵抗素表达，目前尚无相关的研究。目的：本研究主要比较辛伐他汀、洛伐他汀、血脂康几种他汀类药物对CRP诱导的人外周血单核细胞抵抗素表达的影响，并对相关的信号通路进行初步探讨。方法：采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞。单核细胞分别与不同浓度的辛伐他汀(0.1，1，10μM)、洛伐他汀(0.1，1，10μM)或血脂康(25，50，100μg／ml)预孵育2小时，再与25μg／ml CRP共同培养24小时，以检测药物对CRP诱导的抵抗素表达的影响。另一组信号通路实验中，单核细胞分别与不同他汀类药物以及甲羟戊酸(100μM)或法尼基焦磷酸(FPP)(10μM)或牻牛儿基栊牛儿基焦磷酸(GGPP)(10μM)预孵育2小时，再与25μg／ml CRP共同孵育24小时。分别用real time PCR和ELISA方法检测单核细胞抵抗素mRNA表达及细胞培养液中抵抗素的浓度。结果：辛伐他汀和洛伐他汀与单核细胞预孵育2小时能剂量依赖性抑制25μg／mlCRP诱导的抵抗素表达。1μM辛伐他汀和洛伐他汀均能显著抑制抵抗素m RNA水平表达，分别为CRP刺激组的55.4±4.2％，59.6±5.1％(P＜0.05)，以及蛋白水平表达[0.54±0.02ng／ml，0.58±0.08ng／ml，与CRP刺激组(0.89±0.16ng／ml)比较P＜0.05]。甲羟戊酸和GGPP几乎完全逆转两种他汀类药物对CRP诱导的抵抗素表达的抑制作用。50μg／ml血脂康亦显著抑制抵抗素m RNA水平表达，为CRP刺激组的34.9±5.4％(P＜0.01)；下调抵抗素蛋白水平表达，为0.47±0.07ng／ml(P＜0.01)。甲羟戊酸和GGPP只能部分逆转血脂康对CRP诱导的抵抗素表达的抑制作用。结论：三种他汀类药物均能完全或部分通过抑制类异戊二烯代谢及GGPP依赖的信号通路，不同程度地抑制CRP诱导的抵抗素的表达。进一步支持了他汀类药物的抗炎和抗动脉粥样硬化和作用。