论文部分内容阅读
目的:观察表皮生长因子受体(EGFR)、结缔组织生长因子(CTGF)在婴儿胆道梗阻肝内胆管上皮细胞的表达。探讨在婴儿胆道梗阻时,EGFR及CTGF细胞因子与肝内胆小管增生的关系,从而说明EGFR及CTGF细胞因子在婴儿胆道梗阻时,在肝纤维化过程的作用。从而阐明胆道梗阻患儿的肝纤维化进展迅速的部分机制。方法:标本选自河北医大二院住院的胆道梗阻患儿手术活检肝组织20例(观察组),均以行99mTC-EHIDA(美国产INFINIA-Ⅱ-hawkeye检查设备)肝胆显像追踪至24 h内胆囊和肠道未出现放射性显影为标准,并选取无肝胆疾患的年龄为180天内患儿尸检肝组织蜡块5例做为对照组。手术探查时取肝尾叶组织约0.5cm×0.5cm×0.5cm大小,10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,5μm连续切片,经脱脂至水洗,行Masson三色染色。光镜观察肝小叶汇管区结构。应用PV免疫组化方法染色对每组抗原进行标记。分别用兔抗人表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体(编号,ZA-0505,北京中杉金桥生物技术有限公司)及兔抗人多克隆抗体(编号BA0752,武汉博士德生物工程有限公司)。采用用PV免疫组化方法二步检测(PV6001,北京中杉金桥生物技术有限公司)及DAB显色。根据Masson三色染色观察胆小管增生的程度及肝纤维化的程度并结合EGFR及CTGF免疫组化染色检测结果进行综合分析。结果:胆道梗阻各组EGFR及CTGF免疫组化染色阳性分布程度均明显高于对照组。胆道闭锁组和浓缩胆栓综合征组间EGFR及CTGF的表达具有统计学明显差异(三组EGFR表达阳性总体分布不同:Kruskal-Wallis H检验示H=19.224 ,P<0.01;各组间两两比较均P<0.01;三组CTGF表达阳性总体分布不同:Kruskal-Wallis H检验示H=17.517 ,P<0.01;各组间两两比较:胆栓组、对照组分别与闭锁组比较均P<0.01,胆栓组与对照组比较P=0.127, P>0.05 )。胆道梗阻组肝组织门管区胆小管增生及纤维化明显,对照组肝组织无明显胆小管增生及纤维化。胆道梗阻组内胆道闭锁组和浓缩胆栓综合征组间胆小管增生及肝纤维化的程度不同(采用Mann-Whitney U检验示两组间肝纤维化的程度u=4.170,P<0.01;胆小管增生程度u=3.642,P<0.01)。在胆道梗阻组内,EGFR及CTGF与胆小管增生的程度具有相关关系且呈正相关(采用Spearman等级相关检验示EGFR与胆小管增生的程度rs=0.542,P=0.005, P<0.01;CTGF与胆小管增生的程度rs=0.637,P=0.001, P<0.01);胆小管增生的程度与肝纤维化的程度具有相关关系且呈正相关(Spearman等级相关检验示rs=0.913,P=10-6 ,P<0.01);EGFR与CTGF的表达具有相关关系且呈正相关(Spearman等级相关检验示rs=0.587,P=0.002, P<0.01)。结论:EGFR是婴儿胆道梗阻肝纤维化发生发展过程中重要的细胞膜受体,CTGF是婴儿胆道梗阻肝纤维化发生发展过程中重要的细胞因子。EGFR与CTGF在婴儿胆道梗阻时胆管上皮细胞显著表达,两者均与胆小管增生程度及肝纤维化程度呈正相关关系;两者之间具有相关关系呈正相关。提示EGFR及CTGF婴儿胆道梗阻肝纤维化过程中发挥重要作用。这可能是胆道闭锁患儿肝纤维化进展迅速的部分机制。