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目的通过调查内蒙古医科大学附属医院儿童患者肺炎链球菌分离菌株的基因分型特征,了解其优势克隆株,并对其毒力基因表达特征进行分析,进而了解优势克隆株毒力基因表达特征,为进一步探究内蒙古医科大学附属医院儿童患者肺炎链球菌致病特征及机制提供实验数据,为儿童患者肺炎链球菌疾病防治提供临床数据。方法选取2015.12.1-2018.12.30在我院微生物室经微生物培养出肺炎链球菌的儿童及成人分离菌株为研究对象。采用Vitek-2 Compact全自动微生物鉴定及药敏分析系统进行鉴定,采用多位点序列分析方法(MLST)进行菌株同源性分析;应用聚合酶链反应(PCR)方法检测儿童及成人来源肺炎链球菌毒力基因:溶血素(Pneumolysin,ply)、自溶素A(autolysin of Streptococcus pneumoniae,lytA)、酪蛋白裂解酶P(caseinolytic pro-tease P,clpP)、细菌素(bacteriocin)、表面粘附素(pneumococcal surface adhesinA,psa A)、铁吸收ABC转运蛋白(piaA)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因(stkP)和神经氨酸酶A(NanA)等表达率差异;荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测儿童及成人来源肺炎链球菌以上毒力基因转录水平的差异。结果1、MLST结果显示,34株儿童来源肺炎链球菌中,ST271型为22株,为优势基因型,另外ST619、ST143、ST6327、ST2778、ST230、ST872、ST236、ST6339、ST6400、ST2754、ST3387型各1株;31株成人来源肺炎链球菌中,同样以ST271为优势基因型,有19株,ST7725有3株,ST2697、ST1431、ST12650、ST1512、ST1203、ST6270、ST236、ST10829、ST2323型各1株。2、毒力基因PCR结果显示,儿童分离菌株毒力基因ply、lytA、nanA、clpP、bacteriocin、psaA、piaA、stkP检出率分别为:79.14%、67.64%、61.76%、70.58%、52.94%、91.17%、64.7%、32.35%。成人的毒力基因检出率为93.54%、93.54%、100%、54.83%、64.51%、100%、100%、100%。除了clpP外,儿童组其它毒力基因检出率均低于成人组。3、实时荧光定量PCR结果显示:以ATCC19606标准菌株作为对照,ply相对表达量高于对照组的菌株占5.26%(3/57),lyt为12.28%(7/57),clpP为8.77%(5/57),psaA为10.53%(6/57),piaA为0%(0/57),Bacteriocin为5.26%(3/57),stkP为1.75%(1/57);PiaA、Bacteriocin两个毒力基因mRNA在成人及儿童来源的菌株中表达无差异(P>0.05)。而ply、lytA、clpP、psaA和stkP五种毒力基因mRNA在成人及儿童来源的菌株中的表达有差异(P<0.05),差异有统计学意义;在所有试验菌株中,E21菌株ply、lytA、clpP、psaA、piaA、Bacteriocin和stkP等毒力基因相对表达量均高于其它菌株及标准菌株(P<0.05)。结论1.内蒙古医科大学附属医院儿童及成人分离肺炎链球菌菌株中,优势基因型均ST271,且儿童组肺炎链球菌毒力基因携带率普遍低于成人组;2.儿童分离株中,优势克隆株部分毒力基因(ply、lytA、clpP、psaA、stkP)mRNA相对表达量显著高于成人分离株。优势克隆株所致感染应给予高度重视。