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研究背景G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptors GPCRs）是体内最大的膜受体超家族，其内源性配基有很多，如胺类，脂肪酸类，氨基酸类，多肽，蛋白质，类固醇等，以游离脂肪酸为配基的GPCRs分子称之为游离脂肪酸受体（Free fatty acidreceptors FFARs），其中在胰岛细胞中表达这一家族的受体包括GPR40、GPR41、GPR43、GPR84、GPR119、GPR120等。FFARs分子在糖尿病的病理生理机制中发挥重要作用，主要表现为影响葡萄糖代谢和调节胰岛素的分泌，因此可以作为糖尿病治疗的重要潜在靶点。目的检测FFARs在大鼠不同组织和胰岛细胞中的表达，并着重探讨GPR40的内源性配基亚油酸(Leinolic acid LA)、外源激动剂GW9508和拮抗剂GW1100对原代培养大鼠胰岛β细胞和胰岛素瘤INS-1细胞株葡萄糖刺激的胰岛素分泌（Glucose-stimulated insulin secretion GSIS）功能的影响。方法（1）采用胶原酶Ⅴ灌注的方法分离大鼠胰岛细胞，不同密度梯度的Ficoll400纯化后进行原代培养；分别用台盼蓝和双硫腙染色检测胰岛细胞活力和纯度,葡萄糖刺激胰岛素释放试验检测胰岛功能。（2）通过RT-PCR的方法检测游离脂肪酸类GPCRs在大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、结肠组织和原代培养胰岛细胞中的表达变化。（3）将原代培养大鼠胰岛细胞随机分为a和b两组：a组观察低糖（5μM）和高糖（25μM）RPMI1640培养条件下，GW9508（10μM）、GW1100（1μM）和LA（50μM）作用2h后对原代胰岛细胞GSIS功能的影响；b组高糖（25μM）RPMI1640培养条件下，胰岛细胞加入不同浓度的GW9508和GW1100（1μM）培养2h,用大鼠胰岛素ELISA试剂盒测胰岛素分泌水平。（4）将INS-1细胞随机分为a、 b、c三组：a组观察高糖（25μM）RPMI1640培养条件下，不同浓度的GW9508和GW1100（1μM）对INS-1细胞胰岛素分泌功能的影响；b组观察低糖（5μM）和高糖（25μM）RPMI1640培养条件下，不同浓度的LA对INS-1细胞GSIS功能的影响; c组观察高糖（25μM）RPMI1640培养条件下，不同浓度的LA和GW9508（10μM）、GW1100（1μM）共同作用INS-1细胞2h后，测胰岛素分泌水平。结果（1）分离纯化后可得到417±39个IEQ/胰腺，纯度可达90%，培养第3天时胰岛素分泌量达高峰。（2）GPR40和GPR41在脑组织表达最丰富，GPR43主要在脾脏中表达，GPR84和GPR119在脑中表达较为丰富，GPR120在结肠中表达最丰富；FFARs均在大鼠原代胰岛细胞中表达，其中GPR40表达最高。（3） INS-1细胞在25mM葡萄糖培养条件，加入50μM的LA培养2h后GPR40mRNA表达量下降（p <0.05）。（4）在高糖环境中加LA、GW9508和GW1100培养2h后,发现LA使胰岛细胞胰岛素分泌增加（P<0.05, n=3）；加入GW9508后胰岛素分泌量显著增加（P<0.01,n=3）；加入GW1100后胰岛素分泌量有所降低（P<0.05, n=3）。而低糖环境下对胰岛素分泌变化没影响。（5）高糖环境下不同浓度的GW9508能促进原代培养胰岛细胞和INS-1细胞胰岛素的分泌（P<0.05, n=3），加入1μM的GW1100后胰岛素分泌量下降（P<0.05,n=3）。（6）研究不同浓度LA对INS-1细胞胰岛素分泌功能时，结果显示高糖环境下，LA作用INS-1细胞2h后能够促进葡萄糖刺激的胰岛素分泌；在25mM葡萄糖培养条件下，加入50μM的LA后胰岛素分泌量是只在25mM葡萄糖组的3.84±0.73倍，胰岛素分泌量明显增加（P<0.01, n=3）。当GW9508和LA共同培养条件下，LA<30μM时，胰岛素量GW9508组高于25mM葡萄糖组，当LA浓度达40μM后，GW9508组胰岛素分泌量反而下降推测LA和GW9508在一起可能具有协同效应。因此，GPR40能影响胰岛细胞的GSIS功能但并不是唯一的影响因素。结论（1）脂肪酸类GPCRs的组织分布与其生理功能密切相关（2）LA短期（2h）培养能够下调INS-1细胞GPR40mRNA的表达。（3）GW9508作用原代培养大鼠胰岛细胞和INS-1细胞2h后，能够促进胰岛素的分泌，并有一定的浓度变化趋势。（4）GPR40是调节胰岛素分泌的重要信号分子，其激动剂GW9508有望成为治疗糖尿病的新型药物。