基于傅里叶叠层显微的高分辨率动态成像方法研究

来源 :中国科学院大学(中国科学院长春光学精密机械与物理研究所) | 被引量 : 0次 | 上传用户:morningwind2009
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
在生物科研领域,大视场高分辨率的光学成像以及定量的相位成像一直是两个重要的研究手段,前者可以使我们看清更微小的细节,将观察的触角伸入到细胞内部,后者定量化了我们对透明样品的观测,使结果更具参考性。傅里叶叠层显微成像术(Fourier ptychographic microscopy,FPM)作为一种全新的计算光学成像方法,不同于传统显微镜“所见即所得”的观测模式,它通过频谱融合的方式可以实现兼具上述两种能力的革命性观测。为活体生物显微成像、工业检测等领域的应用提供了新的可能。然而,该技术目前还存在一些问题,制约着其性能的发挥。首先,系统像差等静态干扰会导致重建过程出现伪影等现象;其次,传统迭代式算法对照明波矢的准确率要求较高,无法对全视场直接进行重建,只能采用分块重建后拼接的方式,造成大视场重建时效率较低。并且传统算法多次迭代的重建需求也导致系统运算量大,进一步降低了重建效率。再次,传统的平板阵列式照明结构由于空域均匀的LED排布方式,会导致边缘LED的频谱重叠率升高,带来不必要的信息冗余,降低系统的采集效率。最后,当前该技术还无法较好的应对生物领域普遍存在的厚样品三维观测需求。针对上述问题本文开展了如下研究工作:1.为了解决FPM系统中像差的存在对重建结果的影响,建立嵌入光瞳修复过程的正向成像模型。利用结合二阶导数信息的反向梯度下降算法实现对光瞳函数以及样品复振幅的同步重建,有效地消除了系统像差带来的重建伪影以及模糊现象,并提高了算法对数据噪声的鲁棒性,对于PV值为0.32的像差,重建结果的MSE(×0)-3)从23.87降低至1.05。2.针对重建算法对照明波矢较为敏感及重建速度过慢的问题,提出了基于深度卷积神经网络的非迭代式FPM重建算法,利用具有高“香农熵”特征的数据集进行训练提高了网络对样品的普适性,进一步结合空、频域信息构建复合损失函数提高网络对细节信息的重建能力。同时该算法较传统迭代式算法显著降低了对照明波矢准确度的依赖程度,重建视场由传统算法的450×4508)~2提升至1.44×1.448)8)~2,并在单次大视场重建下获得了更好的边缘重建效果,背景的PV值从0.27rad降低至0.08rad。同时该方法将重建过程由传统算法的12次迭代减少到1次,结合GPU加速技术,重建时间由167.5s缩短至112.5ms,速度提高了3个数量级,极大地提高了FPM技术的重建效率。3.针对平板结构LED阵列在倾斜照明下的照明衰减问题。在半球型结构的基础上提出了光强修正措施,解决了光强均匀性的cos一次方衰减。提出了基于频谱均匀采样的方法,将LED设计成同心圆排布结构,对于照明NA为0.98的极限照明情况,相比于传统阵列式平板结构,所需LED数量由1201减少至61个(减少了94.9%);边缘LED的照明亮度提升637.7倍,显著提高了暗场图像的信噪比并降低了曝光时间。提出基于频谱搜索的LED位置误差纠正算法,有效的降低了由于LED装调误差对重建结果的影响,重建频谱的MSE(×0)-3)从5.5降低至0.6。基于上述成果,设计并搭建了高分辨率动态FPM系统,可在整体采集帧率大于1Hz的基础上获得1549)8)的亚波长重建分辨率。成像视场为550×5508)~2,实现了对体外活体细胞内部囊泡、线粒体等微小细胞器的高分辨率动态观测。4.针对FPM系统对厚样品的三维重建问题,基于傅里叶衍射理论提出纵向均匀分布的LED排布方案,结合半球形照明结构使用187个LED实现了最大0.98的照明NA,相比于使用平板LED阵列的3D-FPM重建系统有效减少了所需LED的个数。提出结合Rytov近似的多层衍射模型,并使用梯度下降算法实现了对88)厚透明样品的三维重建,实现了横向1749)8),纵向5249)8)的实测重建分辨率。结合拟牛顿法消除了系统像差对三维重建的影响,将重建结果的MSE(×0)-3)从79.4降低至9.8。为了提高上述系统的采集效率以实现对活体样品的动态三维重建,设计了针对多LED复用照明策略的重建算法以及多种复用照明方式,并利用模拟和实验对其进行分析和验证,实现了优于1Hz的整体采集速率。本文围绕FPM技术的原理以及应用,消除了系统像差对重建结果的影响,并极大地提高了重建效率;通过系统以及算法的改进实现了高分辨率的动态2D、3D重建,进一步提高了FPM技术在生命科学以及细胞显微领域的应用价值。
其他文献
磷在植物生长和发育中发挥重要的作用。土壤中的磷大部分呈固定态无法直接供植物利用,缺磷已成为限制作物产量的重要因素。在分子水平理解和阐明参与植物磷稳态调控的成员及其作用机制,是作物磷高效利用分子设计育种的基础。液泡储存了植物细胞绝大多数的磷,对于平衡胞内磷稳态具有重要作用。实验室前期研究表明,OsSPX-MFS蛋白家族的三个成员OsSPX-MFS1、OsSPX-MFS2和OsSPX-MFS3均为水稻
学位
细胞色素c(cytc)是一类血红素蛋白,几乎存在于所有生命中,主要作为电子载体或末端还原酶参与细胞的能量代谢过程如呼吸作用。与高等真核生物相比,细菌通常拥有多种细胞色素c以支持它们呼吸各类非氧电子受体,这对于它们在自然界复杂环境中的生存至关重要。以呼吸多样性闻名的希瓦氏菌(Shewanella)属无疑是其中最著名的代表,其研究模式菌株奥奈达希瓦氏菌(Shewanella oneidensis)编码
学位
中国亚热带地区是世界生物多样性热点地区之一。该地区既是植物的“博物馆”也是其“摇篮”,但人们对地质历史时期的气候震荡和复杂的地质地貌如何驱动该地区植物多样性形成还知之甚少。选择合适的研究对象,开展系统发育学、亲缘地理学和景观遗传学的整合研究,将为深入理解该地区植物多样性格局的形成机制提供新的见解。紫藤(Wisteria sinensis(Sims)DC.)隶属于豆科(Fabaceae)紫藤属(Wi
学位
微生物是地球上最古老、分布最广、多样性最丰富的生命形式之一。它们虽然个体微小难辨,但却在陆地和海洋生态系统物质循环和能量流动过程中发挥着重要作用。自然环境中,微生物个体很少单独存在,而是彼此聚集在一起形成庞大且高度动态的群落;它们通过细胞间不断的物质、能量和信息交流,相互作用形成错综复杂的生态网络,这些复杂的网络对于理解生态系统的结构和功能至关重要。然而,受限于自然微生物群落的复杂背景以及缺乏拆解
学位
在根际中,植物和无数的微生物相互作用,形成如共生、寄生、竞争等多种关系。植物根部释放的光合产物包括可溶性的糖、氨基酸、有机酸、脂肪酸等,是土壤有机碳源的主要来源,很容易被微生物利用,吸引微生物在植物根部及周围定殖。已有证据表明,植物源的糖类和脂肪酸作为两种不同的碳源形式被根际真菌利用,但是这两个碳源在真菌与植物形成共生关系时各自的贡献,以及真菌利用植物来源的糖和脂肪酸的机制有待进一步阐明。除了需要
学位
透镜的成像作用很早就为人类所认识和利用,传统光学主要通过累计光程实现对光学目标的成像或分光。为了消除光学材料引起的像差、色差等现象,传统光学系统只能通过组合多种光学元件来实现,这使得传统光学系统结构复杂,从而有体积大重量大和造价高等诸多不足之处,很大程度上限制其在诸多领域的推广应用。小型化、轻量化、低成本化是未来光学系统的重要发展方向。近年来,基于亚波长微纳结构的超构材料得到了快速发展,并实现了许
学位
白僵菌(Beauveria)和绿僵菌(Metarhizium)等昆虫病原真菌,是全世界现有真菌杀虫剂和真菌杀螨剂的主要来源,在农林害虫绿色防控中发挥越来越重要的作用。对害虫害螨具有生防潜能的昆虫病原真菌侵入寄主体内后需适应寄主血液微环境,包括pH、高渗透压以及寄主免疫防御产生的氧化胁迫。因此,昆虫病原真菌的杀虫作用依赖于体壁穿透和血腔定殖期间克服寄主免疫反应的能力。本研究试图通过昆虫病原真菌致病性
学位
天文导航系统是一种通过探测天体位置信息确定姿态的导航系统,星敏感器是天文导航系统中精度最高、抗干扰性最强的导航设备。国内星敏感器在空间和近地面夜间任务中得到了广泛的应用,而在近地面白天条件下,较强的天空背景辐射会影响星敏感器的正常工作。随着我国军事实力的不断发展,近地面武器装备对导航系统的测量精度和抗干扰能力提出了更高的要求,使得星敏感器在近地面全天时的应用需求愈发迫切。因此,目前全天时星敏感器是
学位
随着空间望远镜分辨率、集光能力要求的不断提高,光学系统主反射镜的口径越来越大,反射镜组件对重力变化、温度变化、运输发射等环境干扰也变得更加敏感。传统刚性单体镜系统随着口径要求的增大,主镜的制造、加工、检测、运输成本急剧增加,安全风险也不断增大。詹姆斯·韦伯空间望远镜(James Webb Space Telescope,JWST)的成功发射,证明了分块可展开式空间成像系统的可行性,是未来超大口径空
学位
随着航天遥感信息在灾害控制、环境检测、军事领域以及科学研究等应用中的不断深入,遥感卫星技术正经历着前所未有的发展。光学遥感卫星在轨运行过程中,飞轮作为保障卫星姿态控制的重要执行部件,在其正常工作时会产生幅值小、频带宽的扰振力和力矩。这些扰振力和力矩虽然不会造成结构上的破坏,但可能会使敏感光学元件相对位置精度降低,影响成像质量,严重时甚至会使图像模糊、退化、变形。因此,针对飞轮微振动问题开展深入研究
学位