单克隆抗体由于其特异性及高亲和力被广泛应用于基础研究、临床诊断及治疗。目前单克隆抗体制备技术主要有杂交瘤技术,噬菌体等展示技术以及B细胞筛选等,而这些技术具有周期长,费时费力,操作复杂,费用高等缺点。本研究拟利用鸡B淋巴瘤细胞(DT40)建立一种快速高效的单克隆抗体制备系统。DT40细胞免疫球蛋白可变区基因(IgV)持续发生高频基因转换及点突变,使其本身形成一个天然的抗体库,受AID基因调控,在获得分泌特异抗体的细胞后需关闭AID表达以免已获得的特异性抗体继续发生突变。为此,本研究的关键为构建一个AID可调控表达的DT40细胞系。首先,利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除DT40细胞中AID基因。在遗传学水平上通过基因测序验证AID基因被敲除;在蛋白水平上,通过Western-blotting检测AID蛋白不表达;进一步通过免疫球蛋白可变区基因测序,在功能学水平验证AID在细胞中功能的缺失。随后,在AID基因缺失细胞株中稳定表达可调控的AID基因,并通过Western-blotting验证AID蛋白表达并通过IgV区基因测序验证AID诱导IgV基因突变,从而实现DT40细胞中AID基因的可调控表达。最后,利用磁珠偶联的寨卡病毒NS1蛋白对该细胞进行筛选从而获得分泌抗NS1抗体的DT40细胞克隆,通过ELISA筛选和验证抗体的亲和力以及特异性。该单克隆抗体制备系统的建立弥补了传统技术周期长、费用高的缺点,实现了单克隆抗体的快速制备,还可实现抗体亲和力成熟,在基础研究和临床诊断中具有广泛的应用前景。