环磷酰胺（Cyclophosphamide,CPA）作为一种细胞毒性烷化剂和免疫抑制剂,具有抗肿瘤和免疫抑制作用,是儿科领域各类恶性肿瘤、严重自身免疫性疾病等的常用治疗药物之一。也正是由于其具有细胞毒性,特异性不强,环磷酰胺具有一定副作用,尤其在性腺损害方面。生殖系统对化学毒物反应相当敏感,在其他系统尚未出现毒性反应前,生殖系统可能已经受损伤。随着儿童肿瘤和一些严重自身免疫性疾病的长期生存率的不断提高,这部分幸存者进入成年后的远期生活质量,尤其是性腺功能,逐渐引起医患双方的越来越多的关注。研究发现^[1],患儿接受环磷酰胺治疗的年龄越小,远期睾丸组织所有的损害就越小,可能与其性腺增殖尚未启动有关。这项研究结果提示,在生精细胞的增殖处于不分化状态时接受抗肿瘤药物治疗,可避免其受抗肿瘤药物的损伤,是一种有效的保护方法。因此,在使用环磷酰胺时,针对性抑制下丘脑-垂体-性腺轴,从而抑制睾丸或卵巢功能,将有可能保护使用性腺毒性药物后的性腺。促性腺激素释放激素拮抗剂（Gonadotropin-releasing hormone antagonists,GnRHant）可以通过竞争性阻断下丘脑GnRH受体而直接引起下丘脑-垂体-性腺轴的快速抑制。故本课题对曾经接受过环磷酰胺静脉冲击治疗的男性患儿进入成年后进行远期回顾性随访研究,评估这部分患儿的性腺影响;建立环磷酰胺诱导的青春期大鼠睾丸功能远期损害的动物模型,并通过GnRH拮抗剂干预上述大鼠模型,研究GnRH拮抗剂能否改善远期的性腺损害及初步探索其可能的作用机制。第一部分环磷酰胺冲击治疗对男童性腺远期影响的单中心临床观察目的:回顾性分析及随访研究环磷酰胺静脉冲击治疗对男性患儿睾丸的远期影响。方法:回顾性收集2003年12月至2013年12月期间,在苏州大学附属儿童医院住院接受环磷酰胺静脉冲击治疗的难治性肾病综合征、过敏性紫癜性肾炎、系统性红斑狼疮性肾炎等患儿的资料,对停用环磷酰胺5年以上的患者进行远期随访评估。随访内容如下:一般体格检查,外生殖器检查评估,开始使用环磷酰胺时的年龄,随访时的年龄,随访时的停药时间,环磷酰胺用药情况（累积剂量及疗程次数）,血清相关性激素水平的测定,超声检测睾丸容积等。结果:符合纳入标准的男性患儿共53例,电话成功随访到19例,开始用药年龄为7-16岁,累积剂量为32-210mg/kg,累积使用疗程为2-16次,随访时年龄为16-25岁,停用环磷酰胺时间为5-11年,其中前来我院参加体检者共9例,身高、体重、体检睾丸容积和超声下测量睾丸体积无异常,性激素水平（卵泡刺激素FSH、黄体生成素LH、睾酮T、抗苗勒氏管激素AMH、抑制素B、泌乳素PRL）和同龄男性相比无显著性差异,其中1例FSH水平偏高。结论:在儿童期接受环磷酰胺临床常规剂量静脉冲击治疗并停药5～11年后的青年未婚男性的睾丸体积、性激素水平、遗精年龄未见明显变化,有待今后进一步继续随访作全面评估。第二部分促性腺激素释放激素拮抗剂改善环磷酰胺致幼鼠远期睾丸损伤的实验研究目的:随着儿童期肿瘤和自身免疫性疾病存活率不断提高,维持患儿化疗后性腺的正常功能越来越受到重视。本研究旨在纵向探讨GnRH拮抗剂是否可以减轻青春期大鼠环磷酰胺诱导的远期睾丸损伤。方法:将24只5周龄雄性Wistar大鼠随机分为4组,每组6只:（1）正常对照组,（2）环磷酰胺组,（3）GnRH拮抗剂+环磷酰胺组,（4）GnRH拮抗剂组。环磷酰胺按100 mg/kg腹腔注射,仅一次;GnRH拮抗剂在环磷酰胺注射前一小时开始腹腔注射,按0.1 mg/kg,每周3次,共持续4周。于结束用药9周经过一个生精周期后,比较各组雄鼠体重和睾丸重量,血清性激素水平（睾酮T,抗苗勒氏管激素AMH,抑制素B）,光镜下观察各组睾丸组织形态学改变,以及采用免疫组化法、实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组睾丸雄激素受体（androgen receptor,AR）的表达情况。结果:GnRH拮抗剂组大鼠睾丸组织形态学和雄激素表达水平与正常对照组没有显著性改变,GnRH拮抗剂+环磷酰胺组大鼠体重、雄激素受体m RNA和蛋白表达均比环磷酰胺组大鼠显著性增高,与对照组及GnRH拮抗剂组没显著性差异,光镜下GnRH拮抗剂+环磷酰胺组雄鼠睾丸组织形态的损伤程度包括曲细精管的不规则形态、减少的Sertoli细胞及各级生精细胞,减少的管腔内精子细胞数量等较环磷酰胺损伤组改善,雄激素受体表达同样比环磷酰胺组大鼠有所改善。然而各组睾丸重量和血清睾酮、AMH、Inh B没有显著性差异改变。结论:青春期雄鼠采用GnRH拮抗剂可以通过增加睾丸中的雄激素受体表达来安全保护环磷酰胺诱导的远期睾丸损伤。