[目的]利用小鼠胰岛分离和小鼠胰岛移植模型,研究一氧化碳释放分子-2(Carbon monoxide releasing molecules-2,CORM-2)预处理通过抑制胰岛分离过程中胰岛的炎症反应,提高胰岛活性和功能的作用及机制;研究CORM-2预处理对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的胰岛功能损伤的保护及提高胰岛移植效果的作用。[方法]本研究分为三个部分。第一部分:小鼠胰岛分离和胰岛移植模型建立。分离小鼠胰岛细胞,通过双硫腙(DTZ)染色评估胰岛纯度、荧光素二乙酸酯/碘化丙啶(FDA/PI)荧光染色评估胰岛活性;应用链脲佐菌素(STZ)诱导小鼠糖尿病模型并建立小鼠肾包膜下胰岛移植模型。通过监测小鼠血糖、糖耐量实验,评估小鼠胰岛移植模型的成功率及稳定性。第二部分:CORM-2减轻胰岛分离过程中的炎症损伤。实验分组:(1)对照组:用不含CORM-2的胶原酶溶液分离小鼠胰岛;(2)CORM-2组:用含有CORM-2的胶原酶溶液分离小鼠胰岛。通过FDA/PI荧光染色评估胰岛活性、qPCR实验检测胰岛中促炎因子基因表达情况、流式细胞术检测细胞凋亡水平、葡萄糖刺激实验检测胰岛功能。第三部分:CORM-2减轻TNF-α诱导的胰岛功能损伤。实验分组:(1)对照组:小鼠胰岛分离后正常条件体外培养;(2)TNF-α组:小鼠胰岛分离后于50 ng/ml TNF-α条件下体外培养;(3)TNF-α+CORM-2组:小鼠胰岛分离时用CORM-2处理后,于50 ng/ml TNF-α条件下体外培养。通过免疫荧光实验、qPCR实验和葡萄糖刺激实验,研究CORM-2预处理对TNF-α诱导的胰岛功能损伤的保护作用,并进一步通过小鼠胰岛移植模型进行体内验证。[结果]第一部分:分离的小鼠胰岛纯度与活性均>95%;小鼠肾包膜下胰岛移植术后血糖控制平稳,模型稳定。第二部分:相较于对照组,CORM-2组分离的胰岛细胞组织因子(TF)、白细胞介素1β(Il1b)、白细胞介素-6(Il6)、肿瘤坏死因子-α(Tnf)等促炎基因的表达水平显著降低;且CORM-2组胰岛在培养72小时后,凋亡水平显著降低、活性显著提高、β细胞功能相关基因表达水平显著上调,糖刺激胰岛素分泌指数(GSI)显著提高。第三部分:相较于TNF-α组,TNF-α+CORM-2组的胰岛β细胞功能相关基因显著上调、胰岛内胰岛素表达水平和GSI显著提高,并且显著改善小鼠胰岛移植效果。[结论]1.小鼠胰岛分离和肾包膜下胰岛移植模型有效且稳定,是胰岛细胞体外研究和胰岛移植体内研究的合适方法。2.CORM-2预处理显著减轻胰岛分离过程中的炎症反应,显著提高胰岛活性与功能。3.CORM-2预处理显著抑制TNF-α诱导的胰岛功能损伤,显著提高小鼠胰岛移植效果。