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HBV是一种世界范围内严重危害人类健康和生命的嗜肝DNA病毒。全世界大约有3.5亿乙肝病毒携带者,其中约1%发展成重型肝炎。重型乙型肝炎的发病机制仍然不明确,可能是宿主和病毒相互作用的结果。前C区变异与重型乙型肝炎的关系是研究的热点。乙型肝炎病毒存在准种现象,本研究从准种的角度,从点到面,比较重型乙型肝炎患者肝组织和血清中HBV前C区准种及其核苷酸变异特点,试图说明前C变异与重型乙型肝炎的关系。 方法:(1)提取血清和肝组织中HBV DNA。(2)巢式PCR扩增HBV前C区。(3)PCR产物的克隆。(4)内侧引物扩增克隆的目的片断。(5)SSCP/HDA电泳筛选克隆。(6)选择不同的克隆进行测序。(7)采用DNA star软件对测序结果进行分析。 结果:(1)第1例患者肝组织和血清中准种数分别为15种和17种,无明显差别;第2例患者都为17种,无差别;第3例患者分别为14种和8种,肝组织准种复杂性高于血清。(2)测序的72个克隆中,HBV前C区有42个位点变异。发现5个高变异位点:1896 G→A(41/72),1846 A→T(18/72),1856 C→T,1858 T→C(10/72)的双变异,1898 G→A(6/72)。L3中有1856 C→T,1858 T→C的双变异,1898 G→A的变异,无1896 G→A变异。DR1区发现1825 T缺失,1828 C→T,1829 C→T,1831 C→A的变异。 结论:(1)HBeAg阴性的重型乙型肝炎患者,1896变异出现的频率高,但重型乙型肝炎与1896变异无必然关系。(2)重型乙型肝炎患者HBV前C区变异是多位点的,有5个高变异位点,DR1区也有多个位点发生变异,其余位点变异呈现个体化特征,提示可能多个核苷酸的变异导致肝损害加重。(3)重型乙型肝炎患者肝组织和血清中准种数多,准种组成不同。肝组织与血清中HBV变异程度越大,患者预后越差。