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目的:观察肾上腺髓质素(AM)对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法:1、Wistar大鼠随机分为4组:假手术组、IRI组、转空质粒组和转AM质粒组。大鼠右肾切除后1周,用超声微泡造影剂介导的基因转染方法将大鼠AM真核表达质粒转染大鼠肾脏,1周后采用免疫组织化学方法检测转染效率。转染成功后夹闭左肾动脉45min制作肾脏IRI模型,于再灌注24h后留取肾组织标本。2、TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡。3、RT-PCR检测肾组织Bcl-2、Bax和Fas的mRNA表达。4、Western免疫印迹法检测caspase-3、caspase-8和caspase-9的蛋白质表达。结果:1、转染效率:转AM质粒组的AM表达显著高于转空质粒组。2、与假手术组相比,IRI组肾组织凋亡细胞数明显增加(p<0.05);肾组织Bax、Bcl-2、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表达上调(p<0.05),但Bax上调显著,故Bax/Bcl-2升高(p<0.05)。3、与IRI组相比,转AM质粒组肾组织凋亡细胞数明显减少(p<0.05);Bax、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表达下调(p<0.05),Bcl-2表达进一步上调(p<0.05),故Bax/Bcl-2降低(p<0.05)。4、转空质粒组和IRI组比较,上述各指标均无统计学差异(p>0.05)。结论:AM能够减轻肾脏IRI诱导的肾小管上皮细胞凋亡,其机制至少部分是通过抑制caspase依赖的内、外源性凋亡途径实现的。目的:以大鼠单肾缺血再灌注损伤(IRI)模型模拟体内肾脏IRI,通过转染高表达intermedin(IMD)质粒,观察IMD对肾脏IRI后血管生长相关因子HIF-1a、VEGF和Tie-2表达的影响,探讨IMD对肾脏IRI的修复作用。方法:1、模型制作:Wistar大鼠随机分为4组:假手术组、IRI组、转空质粒组、转IMD质粒组。假手术组:切除大鼠右肾1周后,钝性分离左肾动静脉,不夹闭;IRI组:切除大鼠右肾1周后,夹闭左肾肾动脉45min;转IMD质粒组和转空质粒组:大鼠右肾切除后1周,用超声微泡造影剂介导的基因转染方法将大鼠IMD真核表达质粒∕空质粒转染大鼠肾脏,转染成功后夹闭左肾动脉45min制作肾脏IRI模型。分别于再灌注1d、2 d、3 d、4 d、7 d和14 d后留取肾组织标本。2、采用RT-PCR检测HIF-1a、VEGF和Tie-2的mRNA表达。3、Western免疫印迹法检测肾组织VEGF的蛋白质表达。4、ELISA检测HIF-1a和Tie-2的蛋白质表达。结果:1、与假手术组相比,HIF-1a mRNA和蛋白质的表达均于再灌注后1d表达达到高峰,2d持续高表达,3d表达开始明显下降,4d、7d和14d接近于假手术组;VEGF和Tie-2 mRNA和蛋白质表达均于再灌注后1d开始增加,2d达到高峰,3d开始下降,4d、7d和14d接近于假手术组(p>0.05);2、转IMD质粒组大鼠肾组织HIF-1a、VEGF和Tie-2 mRNA和蛋白质的表达于再灌注后1d、2d、3d和4d显著高于同时间点的IRI组大鼠(p<0.05),均于再灌注后1d表达达到高峰,2-3d持续表达,4d开始下降,7d和14d的表达无明显改变(p>0.05);3、上述各指标在转空质粒和IRI组之间的表达差异无统计学意义(p>0.05)。结论:肾脏局部高表达的IMD不仅促进了肾脏IRI后血管再生相关因子HIF-1a、VEGF和Tie-2的表达,而且使表达高峰提前并延长了表达时间,从而参与了肾脏修复过程。