论文部分内容阅读
目的：多发性硬化(multiple sclerosis，MS)是一种以中枢神经系统白质脱髓鞘为主要病理特征的自身免疫性疾病，迄今尚无确定有效的治愈方法。近年来干细胞移植在MS治疗方面展示出广阔前景，其中间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)具有多分化潜能、低免疫原性及高度增殖能力，可通过神经营养、调节免疫等多种作用修复神经损伤。与目前最常应用的骨髓间充质干细胞相比，本研究采用的人脐带间充质干细胞(Human Umbilical cord mesenchymal stemcells，hUC-MSCs)更具备采集方便等多种优点，是目前干细胞移植治疗的理想选择。然而，迄今应用hUC-MSCs治疗MS的研究却鲜有报道。本研究以实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)为MS动物模型，观察应用hUC-MSCs治疗EAE小鼠的疗效，并对其作用机制进行探讨。
方法：雌性C57BL/6小鼠经髓鞘少突胶质糖蛋白(MOG)等免疫诱导EAE模型(免疫之日记为第0天)，于第15天(疾病高峰期)尾静脉注射0.5ml hUC-MSCs(4×106/ml)或同体积培养基。免疫之日起每日进行神经功能评分，连续50天。通过HE、luxol fast blue、银染及免疫组化等方法观察脑与脊髓中炎症反应、脱髓鞘病变、轴突损伤及治疗后hUC-MSCs是否在中枢神经系统分布；通过流式细胞技术与酶联免疫吸附实验检测脾细胞中Th1/Th2CD4+Th细胞比例、Treg细胞、Th17细胞百分比，以及脾细胞增殖和炎症因子(IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ)的水平；通过定量PCR及western blot检测脑与脊髓中髓鞘再生相关的Lingo-1 mRNA及Fyn蛋白表达水平。
结果：1、干细胞的治疗作用：hUC-MSCs治疗组行为学评分比EAE组显著降低(P<0.05)。组织病理学显示，hUC-MSCs可以进入EAE小鼠脑与脊髓，治疗后脊髓中炎症反应与轴突损伤比EAE组明显减轻，脱髓鞘病变显著改善(P<0.05)。2：机制探讨：1)干细胞调节免疫反应，减轻机体损伤：hUC-MSCs治疗组比EAE组Th1/Th2 CD4+Th细胞比例下降，Th17细胞减少，Treg细胞增多(P<0.05)；MOG与ConA(刀豆素)诱导的脾细胞增殖减少(P<0.05)；脾细胞上清中IL-4、IL-10、IFN-γ增高，IL-17降低(P<0.05)。2)干细胞促进髓鞘再生：hUC-MSC治疗组脊髓中Lingo-1mRNA水平低于EAE组(P<0.05)，Fyn蛋白表达高于EAE组(P<0.05)。
结论：hUC-MSCs治疗可以改善EAE小鼠的临床症状与病理过程，其可能机制包括通过免疫调节作用维持免疫平衡，减少自身免疫反应对髓鞘等的损害以及通过作用于Lingo-1途径促进髓鞘再生。