目的:探讨甘油二酯激酶ζ(diacylglycerol kinaseζ,DGKζ)、蛋白激酶CβⅡ(protein kinase CβⅡ,PKCβⅡ)在不同毛色小鼠背部皮肤中的表达、定位及其与毛色形成的相关性。方法:1.通过美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)官网,获取人和小鼠DGKζ的序列;运用多种在线生物信息学分析平台对人DGKζ在各器官组织中的表达及其转录因子、编码产物的信号肽、跨膜结构域、亚细胞定位预测分析,并对人DGKζ的同源性进行分析;对小鼠DGKζ序列启动子所结合的转录因子进行预测。2.取2M白、灰和黑色小鼠各6只,去毛取背部皮肤,行Real-time PCR、Western blotting和免疫组织化学ABC法染色技术检测。结果:1.生物信息学分析结果表明:DGKζ在人体皮肤中表达;预测的人DGKζ启动子可能结合的22个转录因子中ER-alpha、Sp1、p53、c-ets-1和YYY1这5个转录因子在黑素细胞中表达;人DGKζ编码产物不存在信号肽剪切位点属非分泌蛋白,无跨膜区域;主要定位于细胞核,亦定位在细胞质;人与黑猩猩、马、猫、灰仓鼠、牛、豚鼠、野猪、大鼠、小鼠和鸡DGKζ的氨基酸同源性分别为99.8%、98.3%、97.7%、96.6%、96.6%、96.4%、96.3%、96.0%、96.0%、94.6%和78.6%,系统进化树分析发现人与黑猩猩亲缘关系最近,与鸡的亲缘关系最远。预测的小鼠DGKζ启动子可能结合的13个转录因子中ER-alpha、p53和YYY1这3个转录因子在黑素细胞中表达。2.Real-time PCR检测显示,DGKζ、PKCβⅡ在三种毛色小鼠背部皮肤中mRNA表达趋势一致,均为:灰色组>白色组;黑色组>白色组,其差异具有统计学意义(P<0.05);Western blotting检测表明,显示PKCβⅡ活性的p-PKCβⅡ/PKCβⅡ,其变化趋势与DGKζ在三种毛色小鼠背部皮肤中表达趋势一致:灰色组>白色组;黑色组>白色组,其差异具有统计学意义(P<0.05);免疫组织化学ABC法染色检测显示,DGKζ和p-PKCβⅡ在灰色和黑色小鼠背部皮肤表皮生发层及黑素细胞、毛囊的外根鞘、毛母质细胞及毛母质的黑素细胞呈阳性表达,而在白色小鼠背部皮肤表皮生发层、毛囊的外根鞘、毛母质细胞及毛母质的黑素细胞呈阴性表达。结论:1.运用生物信息学分析预测表明,DGKζ可能在人黑素细胞中表达且在哺乳动物间保守性较高;DGKζ可能也在小鼠黑素细胞中表达。2.综合DGKζ、PKCβⅡ在灰色与白色、黑色与白色小鼠背部皮肤中的mRNA和蛋白表达水平的差异,以及DGKζ、p-PKCβⅡ在三种毛色小鼠背部皮肤表皮生发层及黑素细胞定位、毛球毛母质细胞及黑素细胞定位,提示DGKζ、PKCβⅡ可能与皮肤色素沉着及毛色形成具有相关性。