论文部分内容阅读
研究目的：1.研究对比db/db小鼠与正常对照组小鼠在体质量、血糖、血脂等代谢指标上的变化,通过组织病理学技术以及电子显微镜技术观察db/db组小鼠与正常对照组小鼠心肌组织在形态学上的差异。2.应用同位素标记的相对和绝对定量技术(iTRAQ)检测并探讨糖尿病心肌病内质网应激相关的差异表达蛋白,进一步明确糖尿病心肌病变的分子机制。研究方法随机选取7周龄雄性C57BLKS/J db/db小鼠8只作为2型糖尿病模型组(DM),随机选取7周龄雄性C57BLKS/J db/m小鼠8只作为正常对照组(CC),适应性饲养1周后开始实验。将两组小鼠置于相同适宜环境下正常饲养10周,每周定期测量各小鼠的体质量(body weight, BW)、微量血糖的变化并记录。于18周末将所有小鼠空腹过夜并处死,留取血清测定空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、三酰甘油(triglyceride, TG)、糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGES)的含量；留取心肌组织进行HE染色观察心肌组织的病理学变化,用透射电镜观察小鼠心肌组织的超微结构变化,应用iTRAQ技术检测各组小鼠内质网应激相关的差异表达蛋白。研究结果1.一般观察CC组小鼠生长状况良好,精神状态佳,毛发亮泽,活跃。DM组小鼠在实验进程中逐渐表现为毛发蓬松,无光泽,少动,逐渐出现多尿、多饮、多食,体重迅速上升。2.各组小鼠体质量、FBG、TC、TG、AGEs的变化DM组小鼠随着周龄的增加,体质量逐渐增加,与CC组比较,在第8、10、12、14、16、18周,DM组小鼠体质量均显著增加(P<0.01)。实验结束时,DM组小鼠FBG、TC、TG、血清AGEs含量较CC组均显著升高(P<0.01)。3.各组小鼠心肌组织病理学变化CC组小鼠心肌组织HE染色可见心肌纤维排列整齐规则,心肌组织间质正常,细胞核形态清晰,结构完整；DM组小鼠心肌组织HE染色可见心肌细胞肥大、肿胀,肌纤维排列不规则,肌丝断裂,细胞核损伤。4.各组小鼠心肌组织超微结构变化CC组小鼠肌原纤维完整,排列整齐规则,肌浆网结构正常,细胞核核膜完整,形态正常；DM组心肌组织中观察到肌小节失去正常结构,明暗带消失,肌浆网扩张、肿胀,肌纤维间水肿,其间可见炎性细胞浸润。5.各组小鼠内质网应激相关的差异表达蛋白变化DM组小鼠与CC组小鼠心肌组织应用质谱分析结合数据库检索,共鉴定了22个与内质网应激相关的差异表达蛋白,其中上调者6个,下调者16个。研究结论1.与正常对照组比较,db/db糖尿病小鼠的体质量、FBG、TC、TG和AGES水平显著升高。2.与正常组相比较,db/db糖尿病小鼠心肌细胞肥大,肌纤维排列紊乱,肌浆网肿胀,细胞核损伤。3.内质网应激相关差异表达蛋白含缬酪肽蛋白(valosin-containing protein, VCP)、β细胞受体相关蛋白31(β-cell receptor-associated protein 31, BCAP31)、溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶3(lysophosphatidylcholineacyltransferase 3, LPCAT3)在糖尿病心肌病中具有重要作用,并可能为研究或发现糖尿病心肌病防治的新药靶点提供理论基础。