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目的将体外培养的神经干细胞注入到恢复期脊髓损伤的大鼠体内,观察恢复期脊髓损伤大鼠在注入外源性的神经干细胞后肢体功能变化;脊髓损伤大鼠在注入外源性的神经干细胞后,神经干细胞在损伤部位的分布、是否分化及分化结果。材料与方法1.从孕14天的SD大鼠(由郑州大学动物实验中心提供)体内的胎鼠中,提取胎脑海马组织,经机械分离法分离提取细胞、37℃、5%C02培养箱中培养,显微镜下观察细胞生长情况,得到纯度相对较高的神经干细胞;将120只SD大鼠(郑州大学动物实验中心)按改良Allen’s打击法制作脊髓损伤模型,一周后存活90只,将这90只脊髓损伤大鼠进行随机分组,每组30只:(1)对照组:造模但是不进行神经干细胞移植;(2)局部移植组:造模后4W在脊髓损伤病灶局部进行神经干细胞移植;(3)静脉移植组:造模后4W经静脉进行神经干细胞移植。2.分别于移植后的1,2,4,12,24周对随机抽取的各组6只脊髓损伤动物后肢的运动功能进行BBB评分,评定脊髓损伤大鼠的后肢功能变化,并于移植后的1,2,4,12,24周各组随机抽取6只脊髓损伤动物,分别做Brdu免疫组化染色、GFAP免疫组化染色、MAP-2免疫组化染色及ERK1/2免疫组化染色,观察神经干细胞在脊髓损伤大鼠损伤局部的分布、是否分化及分化结果。结果1.三组脊髓损伤大鼠分别作不同处理后,发现三组脊髓损伤大鼠的BBB评分均有不同程度的增加,基本于第12周达最大值,而12周以后无明显变化,而且在4周以后静脉移植组及局部移植组脊髓损伤大鼠的BBB评分明显高于同期对照组大鼠的BBB评分,而静脉移植组和局部移植组之间无明显差别;2.在经过静脉或者局部神经干细胞移植后,静脉移植组及局部移植组病灶局部可见Brdu阳性细胞,静脉移植组及局部移植组病灶局部GFAP、ERK1/2表达逐渐提高,在4周时达最大值,4周以后无明显变化,移植4周后GFAP、ERK1/2表达较同期对照组减少;3.静脉移植组及局部移植组病灶局部MAP-2表达逐渐提高,在4周达最大值,而4周以后呈下降趋势,12周后无明显变化,但MAP-2表达却较同期对照组增多。结论1.无论静脉途径或局部种植,神经干细胞移植后均可在病灶局部增殖分化为神经元和神经胶质细胞,从而促进神经功能的恢复,两种移植方式的作用没有明显区别;2.神经胶质细胞的再生不是线性增加,而是呈现出先增殖分化后抑制的态势;这个神经再生的过程和ERK通路有一定的相关性。