虾夷扇贝(Mizuhopecten yessoensis)是在大连沿海的主要增养殖贝类。但是,随着养殖规模的不断扩大以及养殖环境的变化,虾夷扇贝养殖出现了严重的病害和死亡现象,因此,研究和探索虾夷扇贝死亡的原因及其防治十分必要。本研究是以两种重要的免疫相关基因—大防御素和G型溶菌酶基因作为研究对象,通过分子生物学手段,克隆分析大防御素基因,通过菌刺激实验,利用实时定量方法了解该基因的表达调控规律；通过获得G型溶菌酶基因的启动子序列,并对其进行分析,了解其转录表达调控机制。本研究采用基因克隆的方法,从虾夷扇贝外套膜cDNA文库中克隆得到虾夷扇贝大防御素(MyBD)全长cDNA序列(基因登录号：GH736001)。 MyBD的cDNA全长为720bp,通过生物学软件分析cDNA结构,5’非编码区(UTR)为29bp,开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)384bp,编码127个氨基酸残基,3’UTR长度为307bp,包含一个公认的多腺苷酸化信号序列AATAAA和一个poly(A)尾巴。预测得到的MyBD氨基酸序列具有大防御素的一般特征,包括二硫键和功能结构域,这说明MyBD是大防御素家族的一员。利用QRT-PCR(quantitative real time PCR)分析MyBD mRNA在不同组织中的表达,以及鳗弧杆菌(Vibrillo anguillarum)感染后在虾夷扇贝血淋巴中各时间段的相对表达量。实验发现MyBD在成体扇贝的外套膜组织中表达量最高,菌刺激36小时后实验组与对照组的表达量差异达到最大。因此推论可知,MyBD可能是虾夷扇贝中一种重要的免疫相关基因,在虾夷扇贝的成体组织中起着重要作用。为分析基因结构,通过扩增测序得到了3段内含子序列,编码区两段内含子长度分别为2664bp,2176bp,内含子两侧都具有RNA正确剪接所必需的识别位点(GT/AG),另一段内含子通过基因步移得到,位于5’UTR,长度尚未确定,这3段内含子将已知序列分成4部分。溶菌酶是免疫系统中的重要免疫效应物之一,能通过水解细菌细胞壁杀死细菌。根据虾夷扇贝G型溶菌酶基因的已知序列设计引物,通过基因步移的方法扩增出MyLysoG的5’端侧翼序列,测序所得长度为978bp。 TRANSFAC软件对MyLysoG的5’端侧翼序列进行分析发现,该基因的启动子区除了具有TATA box外,还具备Oct-1、S8、C/EBP、 CdxA等与免疫基因激活的转录因子潜在的结合位点。通过比对15个扇贝的MyLysoG启动子序列发现了9个SNP位点和3个得失位点,这些突变位点具有遗传连锁性,可区分为两种单倍型,两种单倍型中的转录因子结合位点也因突变位点的差异而不同。目前,这种单倍型现象还未在其他扇贝的启动子中发现。这种单倍型标记可以帮助分析G型溶菌酶基因在不同扇贝中的表达水平,进而可以把它当成今后分析扇贝抗病性的潜在标记,这一发现对今后研究扇贝的免疫系统具有重要意义。