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目的:烟雾吸入性损伤的病死率高,发病机制复杂,主要是肺内炎症细胞膜上的NF-κB信号通路激活,诱导大量细胞因子释放,促使炎症反应失控,导致ALI/ARDS的发生。mi RNA是一类非编码单链小分子RNA,可识别结合靶基因的3ˊ-UTR,导致m RNA降解或抑制翻译。mi R-146a通过靶向TRAF6和IRAK1阻断NF-κB活化,负向调控炎症反应。一个mi RNA可以调控多个靶基因,在烟雾吸入性损伤发生发展过程中,mi R-146a是否靶定TMEM33来减轻肺内炎症反应,国内外未见报道。基于此,本实验依据mi R-146a预测靶点构建荧光素酶报告基因重组质粒并进行功能验证,通过小鼠烟雾损伤模型观察mi R-146a对炎症因子和蛋白表达水平的影响,试图证实mi R-146a通过靶向TMEM33减轻肺部炎症反应,提高ALI/ARDS的治疗效果。方法:1.利用生物学软件Target Scan和mi Randa预测TMEM33 m RNA 3ˊ-UTR区可能是mi R-146a的作用靶点,构建含TMEM33 m RNA 3ˊ-UTR荧光报告质粒,双荧光素酶活性检测验证mi R-146a与TMEM33的标靶关系;2.选择SPF级C57小鼠20只,雌雄不限,建立小鼠烟雾吸入性损伤模型,随机分为正常对照组、烟雾致伤+生理盐水组、烟雾致伤+mi R-146a组、烟雾致伤+mi R-control组,每组5只,烟雾吸入性损伤24h后处死小鼠取肺组织,右肺采用HE染色检测肺损伤程度;采用探针PCR检测各组mi R-146a的相对表达量,采用荧光定量PCR检测各组TNF-α、IL-1和靶基因m RNA的表达;左肺行Western实验检测各组COX-2和TMEM33蛋白的水平。结果:1.Target Scan等软件预测显示mi R-146a与TMEM33m RNA 3ˊ-UTR存在互补结合位点,构建的荧光素酶报告质粒经酶切及测序鉴定正确;双荧光素酶报告基因检测系统显示,与p MIR-TMEM33+mi R-control组相比,p MIR-TMEM33+mi R-146a mimics组荧光素酶活性降低62%左右,差异有统计学意义(P<0.01);而p MIR-TMEM33-mu+mi R-146a组荧光强度无明显差异(P>0.01);2.HE染色显示正常对照组小鼠肺组织无明显异常,烟雾致伤组小鼠肺部出现中重度的炎细胞浸润及出血等;Taq Man RT-q PCR结果显示,相对于mi R-control组mi R-146a的表达量(0.829±0.060),mi R-146a组的表达量(11.640±0.190)上调了约10倍(P<0.01);RT-q PCR结果显示,mi R-146a组TNF-α和IL-1m RNA的表达显著低于生理盐水组和mi R-control组(P<0.01);而TMEM33的表达与生理盐水组及mi R-control组相比无显著性差异(P>0.05);Western Blot结果显示,与生理盐水组和mi R-control组相比,mi R-146a组COX-2及TMEM33表达相对降低。结论:1.mi R-146a通过与TMEM33靶基因3ˊ-UTR结合在翻译水平下调TMEM33蛋白的表达;2.mi R-146a通过靶向TMEM33减少肺部炎症因子的释放,减轻ALI。