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目的:采用RT-PCR检测胃癌患者血清、健康人群血清,胃癌患者肿瘤切除前血清、切除后血清中miR-200家族(包括mi R-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-429五个子族)的表达水平。1、了解miR-200家族(miR-200a、miR-200b、mi R-200c、miR-141、miR-429)在健康人群和胃癌患者人群血清中表达的差异性;2、了解miR-200家族各成员在胃癌患者术前和胃癌患者人群术后血清中表达的差异性;3、在miR-200家族五个成员中筛选出目标靶基因(此miRNA在健康人群和胃癌患者人群血清、胃癌患者术前和术后血清中均有差异表达),进行下一步的较大样本实验验证;4、根据健康人群和胃癌患者血清中目标miRNA的检测结果,探讨其诊断胃癌的敏感性和特异性,并与传统胃癌血清标志物CEA、CA-199、CA-724进行对比;根据胃癌患者术前和术后血清中目标miRNA的检测结果,探讨其评估手术治疗效果的潜在临床应用价值。方法:收集兰州军区兰州总医院32例胃癌患者和31例健康志愿者的血液标本,提取其RNA。临床资料通过回顾分析其就诊病历获得。1、筛选:采用RT-PCR检测11例健康志愿者和12例胃癌患者血清、12例胃癌患者术前和术后血清中miR-200家族(miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-429)的表达量,探讨各成员表达的差异性,筛选出在健康人群和胃癌患者人群血清、胃癌患者术前和术后血清中均有差异表达的miRNA;2、验证:将筛选出的目标miRNA进行下一步的实验验证。另提取20例健康人群和20例胃癌患者术前术后血清,检测目标mi RNA的表达水平,并结合前期11例健康人群/12例胃癌患者血清中目标miRNA的表达量,最终完成31例健康人群和32例胃癌患者术前术后血清目标miRNA表达水平的实验检测;3、临床意义研究:(1)利用独立样本t检验分析目标miRNA在胃癌血清中表达的差异性;(2)利用卡方检验或t检验分析目标mi R-200家族成员的表达量与其年龄、性别、肿瘤分化程度、淋巴结转移、TNM分期等临床病理特征的关系;(3)利用受试者工作特征曲线(ROC)及曲线下面积(Area Under Curve,AUC)判断血清中目标miRNA水平对胃癌患者的诊断价值,并与肿瘤标志物CEA、CA-199、CA-724进行比较;(4)利用配对t检验分析胃癌患者术前和术后目标miRNA表达差异性,评估其手术治疗效果的潜在临床价值。结果:1、前期的筛选结果显示,miRNA-200家族5个成员中,miR-200b和miR-200c在健康人群和胃癌患者血清中是差异表达的(均P<0.05),且miR-200c的表达水平相对miR-200b更低,miR-200a、mi R-141、miR-429水平差异无统计学意义(均P>0.05)。同时,胃癌患者血清miR-200c在术前和术后的表达水平具有差异性(P<0.05),miR-200a、mi R-200b、miR-141、miR-429水平差异无统计学意义(均P>0.05)。将miR-200c(在健康人群和胃癌患者人群血清、胃癌患者术前和术后血清中均有差异表达)作为目标靶基因进行进一步验证分析;2、验证结果显示,相对健康人群,胃癌患者血清miR-200c表达水平显著降低(P<0.05),且胃癌患者术后miR-200c表达水平显著高于术前(P<0.05)。验证结果与前期筛选结果一致。Logistic回归分析显示,血清miR-200c水平是胃癌发生的独立危险因素,和胃癌的发生呈负性相关;3、与31例正常对照人群相比,miR-200c的表达在早期(I/II期)胃癌患者血清中就发生了下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。mi R-200c异常表达与临床分期与淋巴结转移数目相关,分期越晚、淋巴转移数越多,血清miR-200c表达量越低(均P<0.05)。而胃癌患者的血清miR-200c与其性别、年龄、浸润深度、分化程度以及肿瘤位置等无统计学意义(均P>0.05);4、血清miR-200c的曲线下面积(0.775)大于CEA(0.646)、CA-199(0.649)和CA-724(0.660);血清miR-200c对胃癌的诊断与CEA、CA-199和CA-724相比,敏感性分别为78.1%、34.4%、31.3%、40.6%(均P<0.05)。血清miR-200c对胃癌的诊断价值显著高于CEA、CA-199和CA-724。结论:1、miR-200c在胃癌患者血清中表达下调,其异常表达与胃癌患者TNM分期和淋巴结转移数目相关,提示其可能作为一种抑癌基因参与胃癌的发生、发展;2、miR-200c作为胃癌标志物具有较高的灵敏度与特异度,血清miR-200c在胃癌诊断和评估手术治疗效果上具有一定的临床应用价值,血清miR-200c有可能成为胃癌有用的新型临床标记物。