【摘 要】
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降钙素原（PCT）是降钙素的前体,由116个氨基酸组成。在人类医学中,它通常作为一种微生物感染及脓毒血症的高特异性的早期标志物。在严重的全身炎症及细菌感染下,患者血浆中的PCT的浓度会在2-4小时内显著升高,并持续至康复,因此PCT通常作为败血症的标志物,用来区分细菌感染,及指导抗生素的治疗。在兽医中,对PCT的研究较少,且缺乏有效的检测手段,因此在实际生产中通常不会使用。本试验首先人工合成牛PC
【基金项目】
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国家重点研发项目,项目名称:畜禽群发普通病防控技术研究,项目编号:2017YFD0502200； 国家重点研发项目,课题名称:家畜呼吸系统疾病诊断与防控技术研究,课题编号:2017YFD0502205；
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降钙素原（PCT）是降钙素的前体,由116个氨基酸组成。在人类医学中,它通常作为一种微生物感染及脓毒血症的高特异性的早期标志物。在严重的全身炎症及细菌感染下,患者血浆中的PCT的浓度会在2-4小时内显著升高,并持续至康复,因此PCT通常作为败血症的标志物,用来区分细菌感染,及指导抗生素的治疗。在兽医中,对PCT的研究较少,且缺乏有效的检测手段,因此在实际生产中通常不会使用。本试验首先人工合成牛PCT基因,并构建牛PCT的表达载体,以大肠杆菌为表达系统,表达并纯化牛PCT蛋白;以牛PCT蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,构建牛PCT特异性噬菌体抗体库,再以原核表达的牛PCT蛋白对抗体库进行5轮的筛选富集,经Phage ELISA鉴定牛PCT蛋白结合的特异性阳性克隆,提取阳性克隆重组质粒,再将sc Fv-p MECS重组质粒双酶切后连接至p ET-22b载体。本课题试验应用噬菌体展示技术成功获得了牛PCT的单链抗体基因,并构建出sc Fv-p ET-22b重组质粒,为后续制备牛PCT单链抗体奠定了基础。
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