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DS147是从临床经验方促孕复方通过醇提后乙酸乙酯萃取并通过药理实验筛选得到的具有促进胚胎着床作用的中药复方有效组分,该复方由黄芪、黄芩、白术和续断组成。中药质量控制是中药研究热点,也是中药现代化发展的中药敲门砖,指纹图谱是质量控制研究的重要手段。本课题以HPLC指纹图谱分析方法为主,对DS147进行质量控制研究。另外,本课题通过检测小鼠正常组模型组和给药组子宫组织蛋白质表达差异的变化,用蛋白组学激光捕捉显微切割技术-二维电泳-质谱(laser capture microdissection-double dimension Electrophoresis-Mass spectum,LCM-DE-MS)技术路线研究分析DS147作用前后在子宫组织细胞中受调节的蛋白分子,以期筛选得到DS147促进着床,调控着床的关键分子,从而为深入准确阐明其药效作用的分子调控机制和作用靶点。 1.促孕复方有效组分DS147指纹图谱及质量研究 利用HPLC指纹图谱对复方DS147进行质量控制,经过多次探索,确定流动相系统为甲醇-水溶液,梯度洗脱,流速0.8mL/min。紫外检测波长为234nm,运行时间120min。以此建立了复方DS147指纹图谱分析方法,获得了复方DS147指纹图谱,找到13个色谱峰作为共有指纹峰。这些指纹峰特征性强,可以用来作为整体评价复方质量的指标。通过对照品的HPLC色谱图保留时间与指纹图谱的比较,确定2、6、9、10、12、13号峰分别是指标性成分獐牙菜苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、芒柄花素、汉黄芩素、白术内酯II,并计算了这6个指标性成分的含量。初步建立了复方DS147质量评价的方法。 2.促孕复方有效组分DS147促着床机制研究 分别利用超排卵模型和吲哚美辛模型造模,自着床后开始灌胃给予DS147,给药5天后颈椎脱臼处死动物,取出子宫组织迅速投入液氮中保存。将液氮冻存的子宫组织粉碎,进行双向凝胶电泳实验,染色,扫描胶条,分析凝胶电泳图,进行蛋白质差异化比较,得到含量改变的蛋白质,选取有显著性变化的蛋白质点做质谱分析。分析表明,正常(CN)组、超排卵模型(CM)组和超排卵模型中药(CZ)组有15种蛋白质表达发生明显改变。和CN组相比,CM组有3种蛋白质明显表达下调,CZ组较之CM组明显表达上调;有12种蛋白质CM组较之CN组明显上调,但是CZ组较之CM组明显下调。正常(IN)组、吲哚美辛模型(IM)组和吲哚美辛中药(IZ)组有23种蛋白质表达发生明显改变,和IN组相比,有7种蛋白质IM组较之IN组明显下调,但是IZ组较之IM组明显上调;有16种蛋白质IM组较之IN组明显上调,但是IZ组较之IM组明显下调。初步确定这些是DS147促着床的靶点蛋白质。