肾小管重吸收功能不仅是反应肾脏功能的重要指标之一，也是影响药物在体内处置过程的一个重要方面。糖尿病肾病（DN）会导致肾小管重吸收功能损伤，中医益气活血法是DN的重要治疗法则，本文选择益气活血法药对黄芪－丹参，考察其对DN大鼠肾小管和高糖损伤肾小管上皮细胞（NRK-52E）重吸收功能的影响。第一部分黄芪－丹参合用改善糖尿病肾病大鼠肾小管重吸收功能的研究目的：评价益气活血药对黄芪－丹参对糖尿病大鼠蛋白尿、肾功能、肾小管重吸收的影响，并探讨其机制。方法：采用链脲佐菌素单次大剂量(55mg/kg)腹腔注射，诱导大鼠糖尿病肾病（DN），造膜成功后随机分成模型组、益气活血组（黄芪和丹参注射液给药组）、格列喹酮组，同时设置空白对照组（正常组）。定时取各组大鼠的尿液检测24小时尿蛋白量、血液测定血糖、血清尿素氮（BUN）、血清肌酐（Cr）、血清甘油三脂（TG）及血清总胆固醇（T-CHO）；取肾脏组织匀浆测定脂质过氧化物（LPO）超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和晚期糖基化终产物（AGEs）；取肾脏组织石蜡包埋切片，以苏木精-伊红（HE）与高碘酸-希夫染色（PAS）染色观察肾脏结构变化；于给药第6周尾静脉注射异硫氰酸荧光素标记牛血清白蛋白（FITC-BSA），30min后取肾脏组织石蜡包埋切片，观察肾小管对蛋白质的重吸收功能，并以免疫组织化学染色法（IHC）观察肾小管上皮细胞megalin表达情况。结果：糖尿病肾病模型大鼠体重显著降低，血糖、24h尿蛋白量、血清Cr、血清BUN、血清TG、血清T-CHO均显著增加，肾组织中LPO和AGEs的含量显著增加(P<0.01)，GSH-Px和SOD的活力也明显下降(P<0.05)。黄芪丹参合用可显著降低24h尿蛋白量（P<0.01），显著减低血清Cr、血清BUN，血清TG和血清T-CHO的水平（P<0.05），并可以降低DN大鼠肾组织中LPO和AGEs的含量(P<0.05)，提高GSH-Px活力(P<0.05)。肾组织切片染色结果显示黄芪－丹参合用可明显改善DN大鼠肾小管病变、提高肾小管对FITC-BSA的重吸收能力、增加megalin在肾小管上皮细胞的表达。结论：黄芪丹参合用可以改善DN大鼠的肾小管病变、减少蛋白尿、改善肾小管重吸收功能，这可能与肾脏组织抗氧化活性增加、肾小管上皮细胞megalin表达水平升高有关。第二部分黄芪丹参合用改善高糖损伤NRK-52E细胞吸收FITC-BSA功能的研究目的：观察黄芪丹参合用对高糖损伤NRK-52E细胞重吸收蛋白质的影响，并探讨其机制。方法：（1）建立高糖损伤的细胞模型：分别采用葡萄糖浓度为5.5、30、40、50、60、80mmol/L的培养基培养细胞24、48、72h，采用MTT法检测细胞增殖活力，选择对细胞增殖抑制作用较强的时间点和糖浓度，作为最佳的高糖损伤造模条件。（2）分别筛选黄芪和丹参保护高糖损伤NRK-52E的有效浓度：分别采用不同浓度的黄芪和丹参含药培养基干预细胞，其中黄芪注射液浓度（以每毫升含有多少克生药表示，下同）分别为1、5、10、20、40μg/mL，丹参注射液浓度分别为10、20、40、80、160μg/mL，分别培养24h后，MTT检测细胞活力，筛选两种药物干预高糖损伤NRK-52E细胞有效浓度。（3）黄芪丹参合用对高糖损伤NRK-52E细胞的保护作用：分别采用黄芪和丹参有效浓度进行配伍，设置高中低三个剂量联合给药干预组，对高糖损伤细胞模型进行干预，培养24h后，MTT法检测细胞增殖活力。（4）黄芪丹参合用对高糖损伤NRK-52E细胞蛋白质吸收功能的影响：NRK-52E细胞同步化后，分为正常组、高糖模型组、联合给药组、格列喹酮组，加入FITC-BSA（30mg/L）后，培养24h。IHC检测各组细胞megalin表达，荧光显微镜拍摄各组细胞的荧光强度，细胞裂解后检测各组细胞内FITC-BSA含量。结果：（1）高糖损伤细胞模型：细胞经30与40mmol/L葡萄糖培养48h对细胞增殖活力无影响，50、60、80mmol/L葡萄糖培养48h对细胞增殖活力影响较大。相对于正常组（5.5mmol/L葡糖糖），50mmol/L作用48h的抑制率为17%，60mmol/L葡萄糖的抑制率为24%，80mmol/L葡萄糖的抑制率为22%。80mmol/L葡萄糖培养24h的抑制率为54%。因此，采用80mmol/L高糖培养24h为最佳造模条件。（2）黄芪和丹参干预高糖损伤NRK-52E细胞的有效浓度：黄芪和丹参含药培养基对高糖损伤NRK-52E细胞均具有保护作用，并有剂量依赖性。经实验考察选择黄芪作用浓度为10、20、40μg/mL，丹参作用浓度为40、80、160μg/mL。（3）黄芪丹参合用对高糖损伤NRK-52E细胞的保护作用：两种药物联合给药组（高、中、低剂量）均有降低高糖抑制细胞增殖的作用，其中以联合高剂量给药组作用最明显，从强到弱依次为：联合高>联合中>联合低。联合高剂量黄芪丹参合用对高糖损伤NRK-52E细胞的保护作用相当于格列喹酮组（20μmol/mL）的98%，比黄芪或丹参单独给药的保护作用更加明显，体现出协同增效作用。（4）黄芪丹参合用对高糖损伤NRK-52E细胞蛋白质吸收功能的影响：IHC结果表明高糖会显著减少NRK-52E细胞膜上megalin表达，黄芪丹参联合给药组和格列喹酮组可以显著恢复细胞膜上megalin表达，且联合高剂量组与正常组比较无显著性差异（P>0.05）。荧光显微镜观察显示，高糖损伤组细胞相对于正常对照组荧光强度明显减弱，且荧光多分布于细胞膜；黄芪丹参联合给药组及格列喹酮对照组细胞荧光强度显著高于高糖损伤组，且与正常对照组一样，多分布于细胞内。荧光分光光光度计检测结果也表明高糖损伤组细胞荧光强度显著低于正常对照组和联合给药组（P<0.05）。结论：高糖（80mmol/L）作用24h可引起NRK-52E细胞数减少，引起细胞对FITC-BSA吸收功能降低，以及蛋白吸收相关受体megalin表达减少。黄芪丹参合用能有效提高受损细胞的增殖能力，通过增加细胞膜上megalin表达，改善细胞重吸收功能。