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马立克氏病（Marek’s Disease,MD）是由马立克氏病病毒（Marek’s Disease Virus,MDV）引起的鸡的一种高度传染性、淋巴组织增生性疾病。自20世纪70年代通过接种MDV非致瘤株或火鸡疱疹病毒（HVT）活疫苗以来,MD得到了很好的控制,但由于MDV毒力的不断增强,降低了疫苗的免疫保扩效果。本文利用HVT作为载体表达MDV gB和白介素2（IL-2）基因,构建了一株重组病毒,并检测它们对SPF鸡抵抗超强MDV（vvMDV）攻击的免疫保护作用。 根据GenBank发表的序列及DNAstar软件分析,选取MDV糖蛋白B（gB）2010bp和鸡IL-2477bp目的片段,在Primer5.0软件的辅助下分别设计两对引物Primer（G1）、Primer（G2）和Primer（I1）、Primer（I2）,并分别在gB引物的5′端加上BglII、3′端加上HindIII;在IL-2引物的5′端加上HindIII、3′端加上SalI。用PCR方法扩增gB和IL-2,将PCR产物分别克隆入pEGFP-C1,构建成pCl-gB-IL,将pCl-gB-IL用NaeI+EcoO109I双酶切,构建外源基因表达盒,并将其克隆入pTK2B载体的TK基因中,构建成pT-C-gB-IL重组HVT转移质粒载体。 确定转染时亲本毒的用量,用磷酸钙共沉淀法将HVT转移质粒载体pT-C-gB-IL与HVT在CEF细胞上进行同源重组,将目的基因导入HVT TK区。用荧光观察法连续筛选10代获得重组病毒rHVT-gB-IL。通过Western-blotting鉴定,该载体在CEF细胞中可有效表达MDV gB和IL-2融合基因,表明重组病毒成功表达了外源基因片段且融合表达产物具有免疫原性;亲本毒和重组毒的细胞半数致死量(TCID50)值基本一致,表明外源基因插入HVT TK后不影响病毒的复制和生物学特性。 用rHVT-RB-IL和HVT（商品苗）分别免疫1日龄SPF鸡,8日龄时用MDV RBlB株超强毒攻毒,隔离饲养9周。剖检饲养期间的死亡鸡,检查并记录病变,每周每组取2～3只鸡采血分离血清以检测MDV抗体,每只鸡采翅部羽毛6根进行琼脂糖扩散实验（AGP）,9周后扑杀全部剩余试验鸡,统计MD的发病情况。血液中MDV抗体的检测结果是:疫苗免疫后第三周开始,试验鸡体内MDV抗体水平稳定上升:羽毛囊中病毒的AGP测定结果为:两试验组疫苗免疫后均可抑制MDV RBlB株超强毒的羽毛囊排毒。虽然两试验组间的差异不显著,但两种疫苗免疫后均能保护试验鸡抵抗RBlB株超强毒MDV的感染,与攻毒对照组的差异显著。