微纳米聚苯乙烯荧光微球在小鼠脂肪组织动态分布的研究

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目的:随着塑料制品使用的增多,微纳米塑料污染已成为重大全球环境问题。目前微塑料(MPs,Microplastic)和纳米塑料(NPs,Nano-plastic)几乎无处不在,空气、水、土壤及食品中均发现了微纳米塑料的存在。水生生物中开展的研究已表明,微纳米塑料能够进入机体,进而造成脂代谢紊乱及神经毒性、生殖毒性等。但哺乳动物中开展的研究尚少,已成为其健康危害评价的瓶颈问题。因微纳米塑料具有脂溶性,其进入机体后是否对脂肪组织具有亲和性尚未明确。因此,本研究采用市售的聚苯乙烯(PS,Polystyrene)荧光微球,对小鼠进行灌胃染毒,利用小动物活体成像系统(IVIS,In Vivo Imaging system)动态监测经口暴露后不同粒径微纳米塑料在小鼠体内脂肪组织中的分布特征,并进行组织学验证,阐明微纳米塑料污染物经口急性暴露后对机体内脂肪组织的亲和性,明确不同粒径对该作用的影响。方法:1.泄露的验证:使用激光扫描共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope,CLSM)和透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM),观察PS微球在0.9%生理盐水对照、通过实验员手轻微震荡处理的100 nm PS悬浮液、使用超声波震荡器超声30 min处理的三种处理下的超声泄露的验证,以及在酸性条件下4h内MPs的是否泄露的验证。2.组织荧光检测:(1)将48只4周龄昆明种小鼠,适应性饲养一周的时间后随机分为以下四组(n=12):生理盐水对照组、100 nm PS染毒组、3μm PS染毒组和10μm PS荧光微球染毒组。采用一次性灌胃染毒方式(200 mg/kg体重),分别于染毒后0.5h、1h、2h和4h四个时间点处死,采集皮下脂、肾周脂和睾周脂三个部位的脂肪组织以及骨骼肌组织,称量各组织重量。(2)利用IVIS测量各个组织中的辐射效率并计算染毒组与对照组荧光强度的fold值(样本的总辐射效率/对照组平均辐射效率),以此为荧光强度指标。3.组织形态学观察:对具有显著荧光成像的实体组织进行组织学检查,以证实IVIS Spectrum的发现。结果:通过超声处理PS悬浮液30分钟后,观察到与浸出有关的强荧光信号,通过轻微震荡处理PS悬浮液后,未观察到荧光染料的泄露。在p H值为2.61,即使持续时间达到4小时(图1.4,A-E),3μm PS微球也没有发生变化。100 nm PS染毒组小鼠三种脂肪组织中的PS荧光强度在各时点均显著高于生理盐水对照组,其中皮下脂和肾周脂组织中的PS含量在2h时达到最高点,睾周脂组织的PS含量在4h时达到最高点,粒径更大的3μm及10μm PS染毒组灌胃后各时点未见与对照组的明显差异,在100 nm PS荧光微球染毒组中,在1h和2h时点,三种脂肪组织荧光强度均与骨骼肌有显著性差异(P<0.05),在4h时点,肾周脂和睾周脂荧光强度均与骨骼肌有显著性差异(P<0.05),在2h时点,肾周脂荧光强度与皮下脂和睾周脂均有显著性差异(P<0.05),且骨骼肌荧光强度最高值也低于脂肪组织的荧光强度最低值。组织形态学观察发现,在100 nm PS处理组的所有脂肪组织中,除脂滴外,脂肪细胞中的荧光信号更亮,脂肪组织和骨骼肌组织相比,脂肪组织的信号强度也更强。结论:小鼠一次性经口暴露微/纳米塑料后,微塑料与哺乳动物体内脂肪组织的亲和性较强,其可能受到微塑料粒径大小,以及不同脂肪组织的解剖部位和组成结构的影响。而微塑料在脂肪组织中浓度的时间-浓度变化趋势表明,微塑料可能会在人体内产生积累,虽然微纳米塑料在脂肪组织中的分布特征尚需进一步研究明确,但是微塑料对人类健康的潜在影响应引起足够的重视。
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