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目的:探讨不同浓度脑脊液(Cerebrospinal Fluid,CSF)对人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCs)源性的神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)增殖与分化的影响,以期为神经退行性疾病的NSCs移植修复治疗提供理论依据。方法:(1)取健康新生足月儿脐带在体外分离培养HUC-MSCs,传代培养至P3代后定向诱导成NSCs并以流式细胞仪检测NSCs特异性表面标记物Nestin(neuroepithelial stem cell protein,神经巢蛋白)的表达。(2)将HUC-MSCs源性的NSCs制备成单细胞悬液,均匀接种于96孔板中,加入不同浓度的脑脊液(0%,5%,10%,20%,30%,50%),标记为:0%CSF组(空白对照组)、5%CSF组、10%CSF组、20%CSF组、30%CSF组、50%CSF组,HUC-MSCs源性NSCs与各浓度组脑脊液共培养72h后,MTT比色法检测各组不同浓度脑脊液对HUC-MSCs源性NSCs增殖率的影响。(3)取传代培养后生长状态良好的HUC-MSCs源性的NSCs,接种于24孔板中,制备细胞爬片,加入以上不同浓度的脑脊液共培养14天后进行神经元标志物MAP-2(Microtubule associated protein 2,微管相关蛋白2)及星形胶质细胞标志物GFAP(Glial fibrillary acidic protein,胶质纤维酸性蛋白)的细胞免疫荧光染色,观察HUCMSCs源性的NSCs向神经元及星形胶质细胞分化的情况。结果:(1)HUC-MSCs源性NSCs与不同浓度脑脊液共培养72h后,5%CSF组、10%CSF组、20%CSF组、30%CSF组、50%CSF组的相对增殖率分别为:(107±8.39)%、(131±15.44)%、(154±19.71)%、(178±26.46)%、(206±22.43)%,与对照组((100±0.00)%)比较,除5%脑脊液,10%、20%、30%、50%脑脊液作用于HUC-MSCs源性NSCs 72h后均显著提高其增殖(P<0.01)。(2)HUC-MSCs源性的NSCs在不同浓度脑脊液中分化培养的第14天,对照组及各实验组中均能观察到MAP-2(+)的神经元及GFAP(+)的星形胶质细胞,0%CSF组(空白对照组)、5%CSF组、10%CSF组、20%CSF组、30%CSF组、50%CSF组细胞的MAP-2(+)细胞比例分别为:(16.01±0.49)%、(16.30±1.01)%、(16.39±0.71)%、(16.55±0.91)%、(25.06±0.65)%、(29.38±0.73)%;GFAP(+)细胞比例分别为:(6.80±0.69)%、(7.01±0.98)%、(7.14±0.75)%、(7.75±1.10)%、(12.55±1.39)%、(17.21±0.99)%。与对照组比较,30%、50%CSF组的HUC-MSCs源性NSCs向神经元及星形胶质细胞分化的比例明显升高(P<0.01),而5%、10%、20%CSF组的HUC-MSCs源性NSCs向神经元及星形胶质细胞分化的比例未见明显差异(P>0.05)。结论:(1)HUC-MSCs能够在体外定向诱导为NSCs,并且可进一步分化为神经元及星形胶质细胞。(2)脑脊液浓度达到10%时,即可促进HUC-MSCs源性NSCs的体外增殖。(3)脑脊液浓度达到30%时,可促进HUCMSCs源性NSCs向神经元及星形胶质细胞方向分化。(4)HUC-MSCs源性NSCs在5%-50%低中浓度正常脑脊液中,较星形胶质细胞更易向神经元方向分化。