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目的: 研究淫羊藿总黄酮(TFE)对衰老睾丸支持细胞(Sertoli细胞)分泌功能衰退的影响,并从IRE1α/XBP1信号通路探讨其分子机制。 方法: 实验一: 将36只18月龄雄性SD大鼠随机分为TFE低、高剂量组和自然衰老组,每组12只。另取10只2月龄雄性SD大鼠作为青年对照组。TFE低、高剂量组分别以10、40 mg/kg剂量灌胃给药,青年对照组和自然衰老组大鼠均灌胃给予等体积质量分数为1%羧甲基纤维素钠溶液,持续给药4个月。 称重,麻醉,处死后取睾丸组织,检测以下指标: (1)称取睾丸重量,计算睾丸指数; (2)HE染色观察各组大鼠睾丸组织形态; (3)免疫荧光法检测各组大鼠Sertoli细胞数量; (4)qPCR、Western Blot和免疫荧光法检测各组大鼠Sertoli细胞分泌相关因子GDNF、BMP4及SCF mRNA和蛋白表达水平; (5)Western Blot法检测各组大鼠睾丸组织IRE1α/XBP1信号通路相关蛋白p-IRE1α和XBP1表达情况; (6)免疫荧光法检测各组大鼠睾丸组织IRE1α/XBP1信号通路相关蛋白p-IRE1α表达及定位。 实验二: 培养小鼠Sertoli细胞株TM4,给予D-半乳糖(D-gal)刺激,建立Sertoli细胞分泌功能衰退模型,并给予TFE进行干预。 (1)采用PCR及Western Blot法分别检测分泌因子GDNF、BMP4和SCF的mRNA和蛋白表达水平; (2)Western Blot法检测IRE1α/XBP1信号通路相关蛋白p-IRE1α和XBP1蛋白表达情况。 结果: 实验一: (1)TFE可明显增加睾丸重量、睾丸指数; (2)HE染色结果显示,青年对照组大鼠曲细精管结构完整,小管内可见各级生精细胞紧密规则排列,与青年对照组比较,自然衰老组大鼠曲细精管萎缩,小管间间隙增大,生精细胞部分脱落,且生精细胞层数和数目明显减少,而TFE用药组大鼠睾丸曲细精管的形态结构均有明显改善; (3)青年对照组、自然衰老组及TFE低、高剂量组各组大鼠睾丸组织中,Sertoli细胞数量无明显差异; (4)TFE可显著上调自然衰老大鼠Sertoli细胞分泌因子GDNF、BMP4及SCF mRNA及蛋白表达水平; (5)TFE显著促进自然衰老大鼠睾丸组织p-IRE1α和XBP1蛋白表达; (6)免疫荧光结果显示,TFE能够增加自然衰老大鼠Sertoli细胞内p-IRE1α表达。 实验二: (1)PCR及Western Blot结果显示,TFE能够上调D-gal刺激小鼠Sertoli细胞TM4分泌相关因子GDNF、BMP4及SCF mRNA和蛋白表达水平; (2)TFE能够提高D-gal刺激诱导的小鼠Sertoli细胞TM4分泌功能衰退模型p-IRE1α和XBP1蛋白表达水平。 结论: TFE可显著改善衰老所致Sertoli细胞分泌功能衰退,其机制可能与调节IRE1α/XBP1信号通路有关。