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目的：结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤,迅速生长而易于转移,但是它的发病机理仍然不清楚。microRNAs(miRNAs)是内源性非编码的小RNA分子,具有重要的生理及病理意义。虽然目前有研究表明miR-451在结直肠癌中表达下调,但是miR-451在结直肠癌中的作用仍然不明确。
方法：取14例结直肠癌及癌旁正常组织,荧光定量PCR方法检测组织中miR-451表达情况,分析miR-451表达与临床病理参数之间的相关性。定量PCR检测正常结直肠组织与结直肠癌细胞SW480、SW620中miR-451表达情况。转染miR-451及miR-451negative control到结直肠癌细胞,实验分为4组:miR-451 mimics转染组(使用Lipo2000转染miR-451 mimics)、NC组(使用Lipo2000转染miR negativecontrol),空白转染组(只加与前组等量的Lipo2000,无miRNA片段),对照组(细胞常规培养,不加Lipo2000和miRNA片段)。荧光定量PCR法检测转染24h后miR-451表达量的改变,CCK-8试剂盒分别检测转染24h、48h、72h后细胞的增殖能力;流式细胞仪检测转染48h后细胞的凋亡情况;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变;免疫印迹技术检测转染48h后靶蛋白的表达情况。
结果：14例结直肠癌组织中,相对于正常黏膜,9例(64.3％)miR-451表达下调。结直肠癌组织中miR-451表达比正常黏膜平均下调3.98倍,差异有统计学意义(P＜0.05)。miR-451的表达与患者年龄、性别、临床分期、组织分级、肿瘤直径、淋巴结转移无关(P＞0.05)。相对于正常粘膜,结直肠癌细胞中miR-451表达也显著下调(P＜0.01)。转染24h后,SW480及SW620细胞的miR-451 mimics转染组miR-451表达分别为144.33±44.31、67.96±13.33,显著高于NC组(P＜0.01);CCK-8检测结果表明,SW480细胞中,miR-451 mimics转染组中细胞增殖与另外3组相比差异不明显(P＞0.05);SW620细胞中,miR-451mimics转染组中细胞增殖在48h、72h明显抑制(P＜0.01);转染48h后,SW480与SW620细胞的miR-451 mimics转染组细胞凋亡率分别为(6.33±2.89)%和(9.63±5.58)%,与另外3组比较,细胞凋亡能力无明显改变(P＞0.05);Transwell小室中作用48h,SW480与SW620细胞的miR-451 mimics转染组侵袭细胞数分别为(17.2±1.8)个/视野、(37.4±6.1)个/视野,侵袭能力较另外3组明显减弱(P＜0.01);转染48h后,SW480与SW620细胞的miR-451 mimics转染组中MIF蛋白相对表达量分别为(0.606±0.028)、(0.779±0.034),与另外3组相比,差异有显著统计学意义(P＜0.01)。
结论：相对于正常黏膜组织,miR-451在结直肠癌组织及细胞中表达下调;上调miR-451表达可抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭能力,miR-451可能对结直肠癌的诊断和治疗起重要的作用。