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目的胃黏膜癌变是一个渐进的过程，往往要经历从肠上皮化生→异型增生→早期胃癌→进展期胃癌。如果能在癌前阶段进行早期有效干预，或可阻断胃黏膜癌变的发生。胃黏膜肠上皮化生(intestinal metaplasia，IM)作为胃黏膜癌前期病变的一种，越来越受到重视。端粒酶(telomerase)是一种核糖核酸酶，具有逆转录酶活性，是细胞永生化和无限增殖的重要条件。人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)作为端粒酶的主要限速成份，其表达的强度与端粒酶活性一致。因此，hTERT的表达可以作为衡量端粒酶活性的指标。研究表明，在胃黏膜癌变过程中，随着胃黏膜癌变程度的加重，端粒酶及其hTERT单位的表达明显增强；在肠化上皮中，亦发现随着肠化程度的增加，端粒酶及其hTERT的表达亦逐渐增强，提示hTERT的表达可能参与了肠上皮化生的过程，但其确切机制不明。本研究hTERT在胃黏膜肠化生的作用及其可能存在的分子机制。方法⑴采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chainreaction, qPCR)检测肠化生与正常胃黏膜组织中hTERT、CDX2的表达变化；⑵采用免疫组化染色检测肠化生与正常胃黏膜组织中hTERT、CDX2以及MUC2的表达变化；⑶采用qPCR技术筛选细胞转染hTERT后，检测肠化生相关基因CDX1、CDX2以及CDX4的表达变化，进一步Western-Blot验证其蛋白水平变化；⑷采用qPCR技术验证细胞干扰hTERT后，检测CDX2表达变化，进一步Western-Blot验证其蛋白水平变化；⑸采用Co-IP验证hTERT与p65相互作用；⑹采用qPCR、Western-Blot、以及双荧光素酶技术验证，NF-κB抑制剂(Bay78-1105)在hTERT对CDX2的上调作用中的影响；⑺采用qPCR、双荧光素酶技术验证转染p65后，KLF4表达变化；⑻采用qPCR、Western-Blot、以及双荧光素酶技术验证转染hTERT后，KLF4表达变化，免疫组化证实肠化生与正常胃黏膜组织中KLF4表达情况；⑼采用双荧光素酶技术验证，干扰KLF4在hTERRT对CDX2的上调中的作用；⑽采用Western-Blot技术验证，干扰p65，在hTERT对CDX2上调作用中的影响；⑾采用Co-IP验证hTERT与c-Rel、p50的相互作用；⑿采用qPCR、双荧光素酶技术验证转染p65和p50后，CDX2表达变化。研究结果一、hTERT与胃黏膜肠化生密切相关⑴肠化生组织qPCR结果表明，hTERT和CDX2mRNA水平均上调；⑵在肠化生组织中，免疫组化研究表明，hTERT表达上调，CDX2表达上调，杯状细胞特异性MUC2蛋白也上调；⑶过表达和干扰hTERT后，CDX2mRNA和蛋白表达水平明显上调和降低，提示hTERT可能通过调控CDX2的表达而参与肠化生过程。上述实验结果提示：hTERT与胃黏膜肠化生密切相关，可能参与了肠化生的发生。二、hTERT通过p65-KLF4通路上调肠化型胃癌细胞CDX2表达⑴通过Co-IP验证hTERT与p65存在蛋白-蛋白相互作用，并促进磷酸化p65的表达，提示hTERT可以与p65结合并加强其对下游基因的转录作用；⑵免疫组化证实hTERT高表达的肠化生组织中KLF4表达明显增加，过表达hTERT可以上调KLF4以及mRNA、蛋白以及启动子活性;⑶通过NF-κB抑制剂及shRNA干扰p65，能抑制hTERT对CDX2、KLF4的上调作用；⑷sh-KLF4干扰能抑制hTERT对CDX2的上调作用。上述实验结果提示p65-KLF4-CDX2通路参与了胃黏膜肠上皮化生的发生。三、hTERT通过c-Rel/p50通路上调CDX2表达⑴干扰p50能有效抑制hTERT对CDX2的上调作用；⑵过表达p50后，CDX2mRNA、蛋白和启动子活性升高；⑶采用Co-IP实验结果表明，hTERT既能与c-Rel，又能与p50存在蛋白-蛋白相互作用。以上实验结果提示hTERT过能与c-Rel/p50形成三聚体调控CDX2的表达，促进胃黏膜肠上皮化生的发生。结论在胃黏膜化生过程中， hTERT可以通过p65-KLF4-CDX2(间接)和hTERT/c-Rel/p50-CDX2(直接)两条通路促进CDX2的表达，进而促进胃黏膜的肠上皮化生的发生。