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目的:寻找周围神经感觉和运动束之间的特异或高差异蛋白,为周围神经感觉和运动束的鉴别和干预损伤修复的分子机制提供新思路;同时阐明周围神经感觉和运动束损伤后不同时间点蛋白量的变化,筛选对神经束再生修复具有重要作用的标志蛋白。方法:通过对正常Wistar大鼠周围神经运动束和感觉束(股神经运动支和隐神经),在Sunderland V度损伤后8小时和8天分别在远侧断端切取5mm样本;6种样本共18组进行分离提取蛋白;蛋白质纯化及定量处理,应用差异凝胶电泳(DIGE)技术荧光标记各组蛋白质;凝胶图像扫描,用图像分析软件(DeCyder)全自动比较分析并识别各组间的差异表达蛋白质图谱;选择表达差异大于1.5倍的蛋白点;高差异蛋白点进行制备胶上自动切割、自动酶切、自动点靶,然后使用MALDI-TOF Pro质谱仪在反射场模式下进行肽质量指纹(PMF图谱)分析鉴定;应用Realtime-PCR技术分析比较蛋白质组学研究的结果。结果:应用2D-DIGE进行分离后,成功地获得了蛋白质组分辨率高、重复性好的荧光差异蛋白质图谱,用BVA软件分析显示9块凝胶平均分离1586个蛋白点。对于蛋白表达的统计学处理采用t检验。校准后选取在9块胶上均出现蛋白表达量上调或下调超过1.5倍、P<0.05的蛋白定义为高差异表达蛋白。本次发现实验组差异表达的蛋白共160个。最终选取16个高差异蛋白点分析鉴定,结果共有14个蛋白点被确切地鉴定。它们是:ApoE、NF-L、TEC、Serpina3n、Peroxiredoxin-2、TPM1、DPYSL2、CaBP1、HSP70、Gng 7、LDHB、Enolase2、Serpina 10、PDIA3。其中(1)周围神经感觉和运动束之间的高差异蛋白有:ApoE、NF-L、TEC、Serpina3n、Peroxiredoxin-2、TPM1。(2)与周围神经感觉束损伤后再生有关的高差异蛋白有:TPM1、DPYSL2、NF-L、Serpina 10、CaBPl。(3)与周围神经运动束损伤后再生有关的高差异蛋白有:Serpina3n、Peroxiredoxin-2、HSP70、LDHB、Enolase2、CaBP1、Serpina 10、Gng7、PDIA3。(4) ApoE在Y/G的比值是-1.94倍,匹配良好,蛋白稳定出现在所有胶中,T-test统计学数值是0.00068,具有统计学意义;8HY/8HG的比值是-2.07倍,匹配良好,蛋白稳定出现在所有胶中,T-test统计学数值是0.0053,具有统计学意义;8DY/8DG的比值是-2.20倍,匹配良好,蛋白稳定出现在所有胶中,T-test统计学数值是0.0069,具有统计学意义。ApoE在正常、Sunderland V度周围神经运动和感觉束(股神经运动支和隐神经)损伤后8小时远断端5mm和损伤后8天远断端5mm等三种时间点感觉束中含量是运动束的2倍左右,ApoE有望作为周围神经感觉和运动束的鉴别高差异标记蛋白。结论:周围神经感觉束和运动束之间的比较蛋白质组学表达存在明显差异,这些差异蛋白质(ApoE、NF-L、TEC、Serpina3n、Peroxiredoxin-2、TPM1)为进一步阐明周围神经感觉束和运动束之间的生理功能差别以实现临床标记鉴别提供实验依据;筛选出对于周围神经感觉束和运动束在不同时间点的再生具有重要作用的蛋白(TPM1、Serpina 10、DPYSL2、NF-L、CaBP1、Serpina3n、Peroxiredoxin-2、HSP70、LDHB、Enolase2、Gng7、PDI A3),可利用这些蛋白在不同时间段的表达差异为临床周围神经再生干预提供新的研究手段。首次成功地把比较蛋白质组学应用于周围神经感觉束与运动束高差异标记物的筛选,现今国内外还没有应用比较蛋白质组学进行筛选周围神经感觉束与运动束不同时间点的差异蛋白的相关研究或报导;突破了传统的周围神经感觉束与运动束在单一时间点鉴别的观念;在探讨周围神经感觉束损伤后不同时间的蛋白质量的变化,和周围神经运动束损伤后不同时间的蛋白质量的变化上作了积极的工作。