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【目的】以鲜天麻为研究对象,优选天麻汁颗粒的成型工艺,并制定其质量评价标准;运用网络药理学预测天麻汁抗衰老的小分子活性成分、作用靶点以及相关信号通路;以秀丽隐杆线虫为模式生物开展相关实验,评测鲜天麻汁及其中中主要活性成分的抗氧化活性并分析其可能的作用机制,进一步明确天麻汁中主要发挥抗衰老作用的药效物质,为天麻相关产品开发及天麻汁抗衰老作用的系统研究提供理论依据。【方法】1.天麻汁颗粒的制备工艺与质量分析研究:选择喷雾干燥和冷冻干燥两种干燥工艺开展研究,优选更适合天麻汁干燥的工艺,并优化其辅料配方;以颗粒剂的成型性、流动性、含水量、吸湿性综合评分为评价指标,对稀释剂的种类、用量以及润湿剂的浓度进行优化;采用薄层色谱法与高效液相色谱法制定适用于企业生产过程中常规检测的天麻汁颗粒的质量评价标准。2.基于网络药理学分析天麻汁抗衰老作用机制:利用超高效液相-三重四极杆串联质谱联用技术(UPLC-MS/MS)测定天麻汁中主要小分子化学成分;通过Swiss target prediction数据库获取天麻汁活性成分的相关靶点,通过Gene Cards、HAGR数据库获取衰老的相关靶点,将活性成分和衰老共有靶点导入String数据库构建PPI网络图,并用Cytoscape软件对其网络节点进行筛选分析;通过DAVID数据库进行GO分析和KEGG信号通路富集分析,并使用Auto Dock Vina工具将5个关键靶点与天麻汁活性成分进行分子对接,以结合能排序方式推导主要抗衰功效成分。3.以秀丽隐杆线虫为模式生物的天麻汁及其中主要功能性成分抗衰老药效及作用机制研究:利用百草枯致氧化应激实验和DPPH实验验证其体内外抗氧化活性,给予秀丽隐杆线虫天麻汁(4、8、16 mg/ml)及其三种主要活性物质:天麻素(GAS,100μM)、对羟基苯甲醇(HBA,50μM)、天麻多糖(GP,500μg/ml),测定并绘制野生型秀丽隐杆线虫(N2线虫)寿命变化趋势图,明确天麻汁及其三种主要活性成分延寿和抗氧化的量效关系;运用生殖实验将产卵量作为秀丽隐杆线虫处于正常生长状态的评价指标,通过检测线虫体内活性氧(ROS)水平、抗氧化酶活性、脂褐素积累情况、FOXO信号通路中age-1、daf-16、sod-3、skn-1基因表达情况验证受试药物对N2线虫的抗衰作用机制。【结果】1.天麻汁颗粒的制备工艺、质量分析研究:选择冷冻干燥作为天麻汁的干燥方法,并优选出鲜天麻汁颗粒最佳的成型工艺为:鲜天麻汁冻干粉与可溶性淀粉用量比例为1:1,润湿剂为80%乙醇溶液进行湿法制粒,所得颗粒含水量较低,成型性、流动性、溶解性较好,吸湿率较低。薄层色谱鉴别方法重现性好、专属性强,斑点清晰。高效液相色谱法分析,对羟基苯甲醇在0.51-204μg/m L浓度范围内具有良好的线性关系,r~2=0.999 8,平均回收率为104.67%,RSD=1.05%。2.基于网络药理学分析天麻汁抗衰老作用机制:利用超高效液相-串联质谱鉴定出天麻汁中化学成分共十种,分别为天麻素、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、原儿茶醛、丁二酸、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C、巴利森苷E;网络药理学预测结果显示,天麻汁中10种活性成分与衰老共同靶点共133个,其中关键靶点共22个,筛选得到前5个关键靶点分别为STAT3、ESR1、SRC、MTOR、CCND1;GO分析和KEGG信号通路富集分析结果显示天麻汁抗衰老主要作用于FOXO、PI3K-Akt、胰岛素、m TOR等信号通路;分子对接结果显示天麻汁中活性成分天麻素、对羟基苯甲醇与关键靶点均具有较好的结合活性。3.天麻汁及其功能性成分对秀丽隐杆线虫抗衰老药效及作用机制研究:结果表明天麻汁、GAS、HBA、GP皆可以显著延长线虫寿命,增强线虫抗氧化应激能力,降低线虫体内ROS和脂褐素水平,提高超氧化物歧化酶(SOD)活性,作用于FOXO信号通路发挥抗衰老作用。但单一化合物的抗衰老、抗氧化活性皆弱于天麻汁,表明天麻汁通过多成分协同、作用于多靶点发挥抗衰老作用。【结论】1.本实验优选的制备工艺切实可行,将天麻汁开发为质量稳定、使用方便、安全的颗粒剂,同时建立天麻汁颗粒的成型工艺与相应的质量控制标准。2.运用UPLC-MS/MS对天麻汁进行成分分析,结合网络药理学分析发现FOXO通路可能为其发挥抗衰老作用的主要通路之一。基于秀丽隐杆线虫的实验表明天麻汁与天麻汁中的HBA、GAS、GP均可以显著延长线虫寿命,实现线虫体内ROS水平与抗氧化酶活性的平衡,改善与衰老相关的生物学特征,作用于FOXO信号通路发挥抗衰老作用。