TGF-β1低表达转基因小鼠构建及其对脊髓损伤修复的影响和免疫调节初探

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[目的]构建TGF-β1低表达转基因(TG)小鼠,探讨TGF-β1在脊髓损伤修复中的作用及其对免疫因子的调节。[方法]用基因操纵的方法构建转基因(TG)小鼠TGF-β1基因敲减模型,多聚酶链式反应(PCR)用于鉴别小鼠的基因型,Western blot检测不同品系TGF-β1基因敲减转基因(TG)小鼠的多种组织中TGF-β1蛋白表达水平,免疫组化(IHC)检测不同组织中TGF-β1定位分布。在确定不同品系TG小鼠不同组织中TGF-β1的抑制率后,选择TGF-β1下调最低的一个品系作为研究对象。从这一品系的外周血获得单核细胞后,用实时定量PCR检测IL-1,IL-6,IL-10,NF-κB和TNFα的表达水平,探讨TGF-β1在免疫调节中的作用。此外,制备T8脊髓全横断模型,观察TGF-β1低表达对脊髓全横断小鼠运动功能的影响。[结果]①成功构建TGF-β1-do系列的5种杂合子转基因后代,其中的4种可产生后代,分别被命名为Founder90, Founder12, Founder41和Founder46。②4个品系TGF-β1基因敲减转基因系列小鼠Founder90, Founder12, Founder41和Founder46的平均蛋白表达下调率分别为57%,32%,18%和17%。③TGF-β1免疫反应阳性物在嗅球,全脑,脊髓,骨骼肌,肺,心,脾,肾,肾上腺,肠和上皮组织中均有分布。④与WT小鼠相比,TGF-β1基因低表达对炎症因子IL-1, NF-κB和TNFα基因的表达水平无明显影响,没有显著差异(p>0.05);没有检测到IL-6和IL-10mRNA在外周血表达。⑤脊髓损伤后TGF-β1低表达TG小鼠后肢运动功能BBB评分值比WT小鼠明显增加(P<0.05)。[结论]①成功构建TGF-β1广泛下调的转基因小鼠模型,并提供了四种不同基因型TGF-β1广泛下调转基因小鼠中TGF-β1蛋白表达下调率及其全身分布,为应用该转基因小鼠模型进行后续免疫调节及脊髓损伤研究奠定了基础。②在本实验中,TGF-β1基因下调不影响外周血细胞炎症因子水平。③TGF-β1基因下调能促进SCI小鼠后肢运动功能恢复,提示TGF-β1在SCI后运动神经可塑性中发挥了重要的作用。
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