1,2,4,5-苯四胺四盐酸盐(C6H14Cl4N4)被称为Y15,是FAK黏着斑激酶抑制剂。FAK是一个分子量为125k Da的蛋白,定位于细胞粘着斑处,被整合素簇激活和酪氨酸磷酸化。酪氨酸397是FAK的一个自动磷酸化位点,是下游信号转导的关键成分,为Src家族激酶的SH2结构域提供了一个高亲和力的结合位点。Y15是一种特异性阻断Y397-FAK的磷酸化和FAK的总磷酸化的抑制剂。Pleiotrophin（PTN）,早年称为肝素结合生长相关分子,是高度保守的人类基因家族的成员。PTN表现出各种生物活性,作为分泌的生长因子,在几种肿瘤患者的血清中高水平表达。表明PTN可能是一种新的血清生物标志物,可用于确定肿瘤负荷并监测癌症患者的治疗状况。PTN既是肿瘤生物标志物,又是抗癌新药开发的靶点。本课题主要是从带有PTN基因的原核菌株中诱导表达PTN蛋白,优化表达条件,通过镍钴亲和层析利用不同浓度的咪唑溶液纯化目的蛋白,采用SDS-PAGE电泳、Western blot鉴定,获得高纯度的PTN蛋白。该蛋白可以促进细胞生长及细胞迁移,具有生物学活性。在用浓度梯度激酶抑制剂Y15作用的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中,加入纯化所得的PTN蛋白,MTT实验证明PTN刺激Y15处理的MCF-7、MDA-MB-231细胞的IC50值大于未加入PTN蛋白组,表明PTN蛋白抑制了Y15对细胞的凋亡作用;利用不同浓度的PTN蛋白刺激激酶抑制剂Y15处理的MCF-7、MDA-MB-231细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,结果显示PTN蛋白抑制细胞凋亡呈浓度依赖性。利用sh PTN干扰载体转染乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231沉默PTN基因,进一步探究乳腺癌细胞中PTN蛋白对Y15的影响。检查细胞对激酶抑制剂Y15的敏感性及细胞的凋亡情况。将sh NC、sh PTN1、sh PTN2转染乳腺癌细胞24h后,比较sh PTN1、sh PTN2在m RNA及蛋白水平上的干扰效率,结果显示sh PTN2的干扰效率最佳。将PTN下调的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231与正常乳腺癌细胞对比,激酶抑制剂Y15对其作用的IC50值有明显的降低,即提高了对Y15的敏感性;流式实验中也得到证明,转染了sh NC质粒的MCF-7、MDA-MB-231细胞组与对照组相比,加入Y15后的细胞凋亡情况没有显著变化,而在转染了sh PTN2质粒的MCF-7、MDA-MB-231细胞中,Y15诱导该组细胞的凋亡率较前两组有显著的提高,显示PTN沉默促进了Y15对乳腺癌细胞的凋亡作用。Western blot实验结果表明在用PTN蛋白刺激MCF-7、MDA-MB-231细胞后Bcl-2、Bax、Cleaved PARP、Cleaved caspase-3、caspase-3蛋白表达与对照组相比没有显著区别,在PTN沉默的MCF-7、MDA-MB-231细胞,加入Y15作用后Bax、Cleaved PARP、Cleaved caspase-3蛋白的表达量较对照组显著升高,Bcl-2蛋白表达量较对照组显著降低,caspase-3蛋白表达量没有显著变化。Western blot实验显示在用PTN蛋白刺激MCF-7、MDA-MB-2321细胞后PI3K（P85亚基）、p-AKT（S473）磷酸化蛋白表达量较对照组显著升高,在PTN沉默的MCF-7、MDA-MB-231细胞,加入Y15作用后PI3K（P85亚基）、p-AKT（S473）磷酸化蛋白表达量较对照组显著降低。综上所述,PTN影响激酶抑制剂Y15的敏感性,细胞内PTN沉默可以促进Y15对乳腺癌细胞的凋亡,并推测PTN沉默及Y15可能通过AKT/PI3K通路来抑制乳腺癌细胞的存活,为后续深入研究及乳腺癌的临床治疗奠定了基础。