周围神经受损后成功再生的条件是保护神经元可生长状态，引导再生轴突通过损伤区，帮助轴突识别靶器官建立新突触。目前，机械修复(显微外科手术)、雪旺细胞(SCs)的植入、电刺激及神经营养因子的应用是帮助周围神经再生与功能恢复的主要手段。神经营养因子的应用能挽救损伤神经元，阻止神经元变性与坏死、提高轴突再生速度，为神经再生提供有利的微环境，从而达到神经再生和功能恢复的目的。睫状神经营养因子(CNTF)具有多种生物活性，能减轻神经细胞损伤的发生，对损伤后的神经元特别是运动神经元有保护作用。CNTF在中枢神经及周围神经系统中广泛存在，其受体由CNTFR_α、LIFR-β、gp130组成，CNTFR_α是CNTF的特异性结合蛋白。在周围神经损伤后CNTF与其受体有其特异的变化模式及调节机制，对神经损伤后的再生有重要作用。 神经元能否维持正常的生理功能与神经营养因子有密切的相关性，不同年龄阶段大鼠机体内CNTF及受体存在状况与神经损伤后表达变化的差异可能与不同年龄大鼠周围神经损伤后神经细胞的存活率、轴突再生的速度、靶器官的识别、新突触的建立等差异有着密切关系。 为此，本研究以幼年、成年、老年大鼠坐骨神经离断性损伤为模型，硅胶管连接离断神经的近、远两端为模型，分二部分进行观察研究：(一)不同年龄大鼠坐骨神经再生中CNTF及CNTFR_α的变化。采用免疫组织化学、Western blotting、原位杂交、RT-PCR检测CNTF、CNTFR_α蛋白及mRNA在脊髓及坐骨神经中的分布与表达强度变化。(二)CNTF对不同年龄大鼠坐骨神经再生的作用。采用①TUNEL法、电镜、流式细胞仪Annexin V／PI双标检测脊髓细胞凋亡；HE、Nissl染色、乙酰胆碱酯酶(ACHE)染色检测脊髓神经元病变；免疫组织化学、Western blotting检测脊髓 CasPase3及Bclxl的分布与表达强度变化，并进行Caspase3活性检测；②辣根过氧化物酶（HRP）逆行示踪、电镜观察神经再生情况；胖肠肌ACHE组化染色检测运动终板ACHE活性；电刺激强迫运动实验、神经传导速度州CV）测定检测神经再生功能恢复情况。旨在研究不同年龄大鼠周围神经再生过程中CNTF及CNTFR。的变化，夕源性CNTF对脊髓神经元保护作用、吝经“再生促进作用、神经功能恢复作用，进一步探讨神经再生在不同年龄阶段的变化规律和调控特点，为神经再生提供理论依据。主要结果、结论如下： 一、CNTF、CNTFR。在脊髓及坐骨神经中的分布与表达变化 CNTF及CNTFR。兔疫组织化学DAB染色的阳性反应产物为棕黄色颗粒，CNTFmMA、CNTFR。m洲A原位杂交BCIP皿BT阳性反应物为紫蓝色颗粒，定位于胞质。Western blotting及 RTICR检测显示： 1．正常大鼠各年龄组脊髓、坐骨神经中均有CNTF、CNTFR。蛋白及m RNRNA表达，幼年组强于成年及老年组o＜O．05X 成年组与老年组比较，差异无显著性意义①＞0刀5卜这可能与不同年龄阶段对＊＊＊F的需求不同相关。 2．本研究系统观察了不同年龄大鼠坐骨神经再生过程中CNTF及CNTFR。蛋白及mKNA表达变化规律，坐骨神经损伤后id、3d、lw各年龄组损伤侧坐骨神经中 CNTF蛋白及 mRNA表达降低，损伤后 id伤侧脊髓CNTF与CNTFR。蛋白及mRNA升高，损伤后Zw、4w损伤侧坐骨神经及脊髓中 CNTF与 CNTFR。蛋白及 mRNA表达增高，sw、12w损伤狈坐骨神经、脊髓＊＊＊F及＊＊＊FR。m RNRNA表达逐步减弱（P＜0刀5或0刀1）。结果表明，坐骨神经损伤后再生过程中大鼠坐骨神经、脊髓CNTF及CNTFR。蛋白及mRNA表达变化情况基本一致，与神经再生髓鞘化的进程密切相关。坐骨神经损伤后损伤侧脊髓、坐骨神经中CNTF及CNTFR。高水平状态持续时间随年龄增长而缩短，周围神经再生过程中对CNTF的需。求可能存在年龄依赖性。 3．坐骨神经损伤后CNTFR。mRNA的增高，提示外源性的给予正好能 ·x· 满足神经再生的需求。各年龄组在损伤后不同时相点CNTF组伤侧脊髓、 坐骨神经组织中 ＊＊＊F及＊＊＊FR。表达较生理盐水组增高o功刀5或 0刀1），增高时间幼年最长，成年次之，老年最短。 4．损伤后生理盐水组及CNTF组对侧未伤侧脊髓、坐骨神经CNTF及 ＊＊＊FR。表达，除幼年伤后12W较幼年正常组低外①功刀5），其余各组与正 常组比较，差异无显著性意义o＞0刀匀。其可能原因是机体应激情况下幼 年 CNTF及 CNTFR。显著增高，直到损伤后 12W进入成年阶段的幼年大鼠 CNTF及 CNTFR。才降低到成年水平，而成年及老年大鼠在实验进程中年 龄段未发生明显改变。 二、CNTF对不同年龄大鼠坐骨神经再生的作用及其机制 1．CNTF对损伤后不同年龄大鼠脊髓前角运动神经元的保护作用 ＊）HE、NISSI染色、ACHE染色显示神经损伤后各年龄组伤侧脊髓神 经元有不同程度的损害，神经元中NISsl小体溶解，ACHE表达减少。外 源性CNTF的给予正好能满足神经再生的需求，CNTF可使ACHE表达增