目的 制备甲型流感病毒X31（H3N2）鼠肺适应毒株,并探索鼠肺适应的分子机理;对流感新型纳米颗粒疫苗NM2e+DP在BALB/c小鼠中的免疫保护效果进行评价。方法 1.将低小鼠致病性的H3N2甲型流感病毒X31原型株在鸡胚尿囊腔接种扩增后收获病毒,在BALB/c小鼠中传代适应获得小鼠高致病性适应株:将甲型流感病毒X31以滴鼻方式感染BALB/c小鼠,通过取肺组织匀浆收获病毒再次滴鼻方式感染新的小鼠,在小鼠肺部连续多次传代,采用MDCK细胞进行甲型流感病毒TCID50的测定,病毒经滴鼻感染小鼠,连续观察2周,记录小鼠体重改变与死亡数,分析致病力改变确定LD50,最终获得高致病性鼠肺适应毒株,通过二代测序技术比较原型株与高致病性鼠肺适应毒株全基因组序列,初步分析H3N2鼠肺适应分子基础。2.基于H3N2的NP与M2蛋白的氨基酸序列制备流感新型纳米颗粒疫苗NM2e+DP,同时制备NM2e+Al（OH）₃+CpG疫苗,通过肌肉注射或滴鼻免疫BALB/c小鼠,利用ELISA和ELISPOT方法检测NP与M2e特异性体液免疫和细胞免疫反应,末次免疫后第14天,采用同型流感病毒X31（H3N2）和异型流感病毒PR8（H1N1）通过滴鼻方式进行攻毒,逐日观察小鼠体重变化和死亡情况,连续观察2周,比较分析不同佐剂疫苗免疫后的保护效果。结果 1.低小鼠致病性的H3N2甲型流感病毒X31原型株,经过在BALB/c小鼠肺部连续传10代后,获得H3N2鼠肺适应株X31_MA,肺组织匀浆液中病毒滴度显著升高(TCID50滴度从P1代低于10/ml到P10代升高至10^3.5/ml),致病力较适应前明显增强,X31 P1代病毒感染小鼠全部存活,P5和P10代病毒感染小鼠从感染6天后出现死亡,至第8天小鼠全部死亡,X31_MA感染小鼠从感染3天后出现死亡,至感染6天后全部死亡。全基因组测序发现,与原型株X31相比,鼠肺适应株X31_MA共出现4个氨基酸突变,其中血凝素HA有3个氨基酸位点发生突变,PB2有1个氨基酸位点发生突变。2.流感新型纳米颗粒疫苗NM2e+DP在BALB/c小鼠中诱发了NP和M2e特异性体液免疫反应,抗体IgG滴度分别为10⁶和10⁴,同时诱发了针对NP_55-69和M2e的细胞免疫反应;肌肉注射NM2e+DP能保护100%小鼠抵御20LD₅₀同型流感病毒（H3N2）鼠肺适应株X31_MA攻击,保护90%小鼠抵抗20LD₅₀异型流感病毒（H1N1）PR8鼠肺适应株攻击,肌肉注射较滴鼻免疫诱发了更强的免疫反应和更好的保护效果。结论 成功获得H3N2高致病性鼠肺适应株X31_MA,HA和PB2蛋白中氨基酸的突变与X31的鼠肺适应密切相关。通过肌肉注射方式免疫BALB/c小鼠时,新型纳米颗粒佐剂DP可增强流感病毒NM2e融合蛋白的免疫原性和保护效果,其保护效力与Al（OH）₃+CpG相当,可诱导较强的同型免疫保护与交叉免疫保护;肌肉注射所诱发免疫反应及保护效果优于滴鼻免疫。