牙髓卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞基质金属蛋白酶9表达的影响

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目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.endodontalis)脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)对小鼠成骨细胞MC3T3-E1表达基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的影响及是否有核转录因子κB(NuclearFactor-κB,NF-κB)信号通路的参与。  方法:以不同质量浓度的P.endodontalis LPS(0~20μg/mL)刺激MC3T3-E1细胞24 h;以10μg/mL P.endodontalis LPS作用于细胞不同时间(0~48 h)后,采用实时逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription-polymerase chain reaction,real-time RT-PCR)、酶联免疫吸附实验(enzyme-1 inked immunosorbent assay,ELISA)和明胶酶谱法检测MMP-9 mRNA和蛋白的表达以及酶活性变化。采用NF-κB信号通路特异性抑制剂Bay11-7082预处理细胞1h,检测其对P.endodontalis LPS刺激MC3T3-E1细胞后MMP-9 mRNA表达的影响。采用SPSS13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。  结果:不同质量浓度P.endodontalis LPS(0~20μg/mL)刺激MC3T3-E1细胞24h后,MMP-9 mRNA和蛋白的表达具有剂量依赖性,20μg/mL组mRNA的表达量约为空白对照组的7倍,蛋白表达量从(5395±362) pg/mL(空白对照组)增加到(12684±375) pg/mL(20μg/mL组)。当10μg/mL P.endodontalis LPS作用于MC3T3-E1细胞24 h时,MMP-9 mRNA的表达量最高,作用时间延长至48 h,MMP-9 mRNA表达量较24 h略下降,蛋白表达量最高,为(35055±2346)pg/mL,酶活性最高。10μmol/L的Bay11-7082预处理细胞1h后,显著降低了P.endodontalisLPS诱导的MMP-9 mRNA的表达水平(P<0.01)。  结论:P.endodontalis LPS可能通过激活NF-κB信号通路诱导小鼠成骨细胞表达MMP-9。
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