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目的:肝缺血再灌注(HIR)是肝外科手术中常见的病理生理过程,不仅可造成肝损害,还可引起脑损伤,甚至导致认知功能障碍。处于生长发育期的小儿神经系统非常脆弱,更易受到外界刺激的伤害,甚至可能留下远期神经系统后遗症。N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid,NMDA)受体是广泛存在于脑的兴奋性谷氨酸受体,与学习记忆能力关系密切,其介导的兴奋性毒性是脑损伤的关键机制之一。非受体酪氨酸激酶Src可上调NMDA受体2A亚基(NR2A)的酪氨酸磷酸化水平,导致NMDA受体过度激活,大量钙离子内流及钙超载而介导兴奋性毒性。突触后密度蛋白95(PSD95)可与Src、NR2A耦联形成信号模块,进一步促进Src与NR2A之间的相互作用。本研究拟评价HIR对幼鼠海马神经元以及远期认知功能的影响,并探讨Src-PSD95-NR2A信号模块相关机制。方法:选择2周龄C57小鼠建立70%HIR模型,分别在再灌注后6 h、1 d、3 d、7 d四个时间点,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠血清中的脑损伤标志物S100β和神经元特异性烯醇化酶(NSE)浓度,蛋白印迹法检测小鼠海马组织Src,p-Src,NR2A,p-NR2A表达情况。然后选择HIR 3 d进一步分为假手术(sham)组、Src抑制剂PP2预处理+假手术(sham(PP2))组、NR2A抑制剂NVP-AAM077预处理+假手术(sham(NVP))组、HIR组、PP2预处理+HIR(PP2)组、NVP-AAM077预处理+HIR(NVP)组,HE染色法观察幼鼠海马组织病理损伤,TUNEL染色观察海马神经元凋亡并计算凋亡指数(AI),蛋白印迹法检测c-Src、p-Src、NR2A、p-NR2A、PSD95、cleaved caspase-3蛋白水平,免疫共沉淀法检测Src、PSD95、NR2A相互作用,生化分析仪检测血清ALT、AST浓度,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α,干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-6浓度。另一部分小鼠分为sham组、HIR组、PP2组、NVP组,于再灌注30 d应用Morris水迷宫评价小鼠远期认知功能,然后将小鼠处死,蛋白印迹法检测海马组织c-Src、p-Src、NR2A、p-NR2A、PSD95蛋白水平,ELISA法检测血清TNF-α,IFN-γ和IL-6浓度。结果:HIR处理后各组小鼠血清中的S100β和NSE较sham组均明显升高,且于再灌注3 d达到最高水平(P<0.05);海马组织c-Src与NR2A在各时间点的表达水平差异无统计学意义(P>0.05),但是p-Src/c-Src与p-NR2A/NR2A较sham组明显升高(P<0.05),p-Src/c-Src于再灌注后1 d、3 d达到最高水平,p-NR2A/NR2A于再灌注后3 d达到最高水平,因此我们选择HIR 3 d的小鼠进一步探讨相关机制。HIR处理后海马组织明显水肿,细胞排列紊乱,AI升高(P<0.05);PP2与NVP-AAM077预处理可减轻海马神经元病理损伤,降低AI(P<0.05)。HIR处理后p-Src/c-Src、p-NR2A/NR2A升高,Src-PSD95、Src-NR2A相互作用增强(P<0.05);PP2预处理可同时降低Src、NR2A的磷酸化水平以及Src-PSD95、Src-NR2A的相互作用(P<0.05),NVP-AAM077预处理也有相同的效果;提示Src可通过PSD95与NR2A相互影响。HIR后小鼠血清ALT、AST、IFN-γ和IL-6浓度较sham组明显升高(P<0.05),PP2与NVP-AAM077预处理不能改变它们的血清浓度(P>0.05),提示PP2与NVP-AAM077通过直接作用于海马组织相关蛋白发挥海马保护作用,而对HIR原位损伤以及炎症介质的释放无缓解作用。造模30 d后水迷宫实验结果显示小鼠逃逸潜伏期以及平均游泳速度各组之间差异无统计学意义(P>0.05),HIR组小鼠停留在目标象限的时间较sham组明显缩短(P<0.05),PP2与NVP-AAM077预处理可延长小鼠停留在目标象限的时间(P<0.05);HIR 30 d后小鼠血清TNF-α、IFN-γ、IL-6浓度以及海马组织c-Src、p-Src、NR2A、p-NR2A、PSD95蛋白水平各组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:HIR可导致2周龄小鼠海马损伤和远期认知功能障碍,这与NR2A过度磷酸化介导的兴奋毒性有关,Src可通过自体磷酸化并加强与PSD95及NR2A的耦联进一步促进NR2A的磷酸化,介导海马损伤。通过探索这一机制,我们希望为小儿肝外科术后脑损伤和远期认知功能障碍的防治提出新的思路。