论文部分内容阅读
目的:通过分析棉酚对Jurkat T细胞和小鼠淋巴细胞增殖和凋亡作用的影响,以及对二硝基氟苯(dinitrofluorobenzene,DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应(delaytype hypersensitivity,DTH)的免疫药理效应,探讨棉酚免疫抑制作用的机制。方法:1.将不同浓度的棉酚作用于Jurkat T细胞,用MTS比色法检测细胞存活率;以AnnexinV-PE染色分析细胞凋亡;用Hoechst33342染色观察核形态;用荧光染料Mitocapture结合流式细胞术和激光共焦显微镜检测线粒体跨膜电位变化。2.分离小鼠淋巴结细胞,以CFSE染色,加入佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析棉酚对淋巴细胞增殖率的影响;以MTS检测淋巴细胞的增殖情况;用免疫染色检测淋巴细胞活化和淋巴母细胞转化情况;以Annexin V-PE染色分析细胞凋亡;用Hoechst33342染色观察细胞核形态。3.采用0.5%DNFB腹部致敏,耳廓激发的方法建立小鼠DTH模型。激发后48 h,分析棉酚对DTH模型小鼠耳组织肿胀、胸腺指数和脾脏指数的影响;光学显微镜下观察小鼠耳廓组织学变化;MTS法检测淋巴结淋巴细胞增殖情况。结果:1.棉酚对细胞的抑制作用与药物存在时间-剂量依赖关系;高浓度棉酚作用后大量细胞核呈现染色质固缩、核碎裂和致密浓染等凋亡特征;随着浓度增加细胞线粒体跨膜电位明显降低。2.结果显示,棉酚对PDB+Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P＜0.01),且呈剂量依赖性。免疫染色结果显示棉酚能同时明显抑制B细胞和T细胞亚群淋巴母细胞的转化和聚集形成。凋亡率随着棉酚作用时间的延长而上升,存在时间和剂量依赖关系。3.结果显示棉酚(25 mg/kg/d)处理组与DTH组具有显著差异(P＜0.05),能明显抑制DNFB引起的炎症反应;耳廓局部组织学检测也表明,棉酚能够抑制DNFB诱导的DTH,明显减少淋巴细胞的浸润;棉酚能降低DTH小鼠胸腺指数和脾脏指数;棉酚处理组DTH小鼠淋巴结淋巴细胞的增殖受抑制(P＜0.05)。结论:1.研究表明棉酚能有效抑制Jurkat T细胞增殖和诱导其发生凋亡,并呈现出时间-剂量依赖关系,其诱导凋亡的作用可能依赖于线粒体途径。2.棉酚能有效抑制小鼠淋巴细胞体外增殖和诱导其发生凋亡,并呈现出时间和剂量依赖关系。3.棉酚可显著抑制DTH小鼠耳组织肿胀和淋巴细胞浸润程度。降低胸腺和脾脏指数,抑制淋巴细胞的增殖并诱导淋巴细胞凋亡可能是其作用机制之一。