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子宫珠蛋白(uteroglobin, UG)是一种具有抗炎、抗氧化等多种生物活性的小分子分泌性蛋白,它的生物学作用可能有赖于子宫珠蛋白结合蛋白(UG结合蛋白,Uteroglobin-binding protein, UGBP)的介导。但目前对UGBP的基因结构学功能还了解甚少,对其研究远远滞后于对其天然配体UG的研究,这必将限制对UG生物学功能全面深入的认识,也必将限制其可能的临床应用,因此,针对UG结合蛋白进行探索性研究具有重要意义。我室前期研究结果显示：UG活性片段Antiflammin-1(简称AF-1,对应于UG分子中第39-47位的氨基酸序列)能够与主要在质膜上的UGBP特异性结合,并且AF-1通过UGBP的介导可影响小鼠肺成纤维细胞(NIH3T3)内ERK磷酸化水平,提示UGBP可能做为AF-1的受体参与其功能的发挥。但AF-1对肺成纤维细胞增殖有何影响未见报道。为此,本课题观察了AF-1对肺成纤维细胞增殖的影响,并进一步探讨了UGBP在介导AF-1有抗肺成纤维细胞增殖效应中的作用,为揭示AF-1抗肺纤维化的受体机制研究提供新的启示。方法：①BrdU-ELISA法测定小鼠肺成纤维细胞(NIH3T3)的细胞增殖；②流式细胞术检测细胞周期变化；③采用RT-PCR和流式细胞术分别检测各组细胞cyclinDl及p27 mRNA和蛋白的表达水平；④采用抗UGBP抗体作为工具药物探讨UGBP的生物作用。结果：1. TGF-β1(0.5～15ng/ml)作用12h,呈剂量依赖性促进NIH3T3细胞增殖,其中以10ng/ml促增殖效应最为显著(P<0.01)。2.单独加入AF-1(4×10-7～2.5×10-4mol/L)对NIH3T3细胞增殖均无显著影响(P(?)0.05)。AF-1 (4×10-7～2.5×10-4 mol/L)预处理可呈剂量依赖性抑制TGF-β1 (10ng/ml)促NIH3T3细胞增殖作用(P<0.01),且该抑制作用可被抗UGBP抗体所阻断(P<0.01)。3.流式细胞术结果显示,TGF-β1 (10ng/ml)处理NIH3T3细胞12h可使增殖指数(PrI)达到峰值(P<0.01)；若向TGF-β1诱导的NIH3T3细胞中提前孵育AF-1 (10-5mol/L)预处理可抑制TGF-β1所致PrI的增高(P<0.01),该抑制效应可被抗UGBP抗体阻断。4.单独比较各组细胞G1、S、G2期之间的差异,可以发现TGF-β1+AF-1组比TGF-β1组S期细胞百分比显著下降(P<0.01)；而TGF-β1+AF-1组与TGF-β1组之间G2期细胞百分比没有显著性差异(P>0.05)。5. PT-PCR结果显示,cyclinD1和p27 mRNA在各组NIH3T3细胞上均有表达。TGF-β1可促进cyclinD1 mRNA表达(P<0.01)：AF-1可抑制TGF-β1促cyclinD1 mRNA表达(P<0.01),且该抑制效应可被抗UGBP抗体预处理所取消(P<0.01l)。p27 mRNA的表达结果与上述情况相反,TGF-β1可降低p27 mRNA水平(P<0.01), AF-1对TGF-β1减弱p27 mRNA表达有抑制效应(P<0.01),且该抑制效应可被抗UGBP抗体预处理所取消(P<0.01)。6.流式细胞术检测NIH3T3细胞核中cyclinDl和p27蛋白水平结果显示,TGF-β1组cyclinDl表达水平显著高于空白组(P<0.01)；AF-1抑制TGF-β1促cyclinDl表达作用(P<0.01),且该作用可被抗UGBP抗体预处理所取消(P<0.01)。p27的表达结果显示,TGF-β1组p27表达水平显著低于空白组(P<0.01); AF-1对TGF-β1减弱p27表达起抑制作用(P<0.01),且该作用可被抗UGBP抗体预处理所取消(P<0.01)。结论：1.AF-1对TGF-β1诱导NIH3T3细胞的增殖和细胞周期的促进均有抑制效应,该效应有赖于UGBP的介导。2.AF-1对细胞周期的调控点主要阻滞G1向S期的转化,而对细胞周期另一个限制点S期向G2期的转化无明显影响。3.AF-1抑制TGF-β1促NIH3T3细胞周期的机制与cyclinD1和p27的表达变化有关,并有赖于UGBP介导。