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山羊是人类重要的经济家畜,主要提供肉、奶、羊绒、皮等多种产品。与其他山羊相比,大足黑山羊具有较高的繁殖率。大足黑山羊公羊具有性成熟早、生长发育快、抗病性强、遗传稳定等特点。在山羊生产中,山羊睾丸的发育以及精子的正常发生是影响雄性繁殖性能的关键因素。之前的研究已经证实,lncRNAs在睾丸发育和精子发生中起着重要的调节作用。尽管lncRNAs几乎参与基因调控的每个步骤,调控机制也很复杂多样,但在山羊睾丸中鲜有人对其进行测序发掘。为了探讨lncRNAs在大足黑山羊睾丸中的作用,采用高通量测序方法筛选出了可能与精子发生和睾丸发育相关的lncRNA LncNONO-AS,其靶基因为NONO。之前有研究发现,雄激素受体（AR）在睾丸中可能受到NONO的调控,猜想LncNONO-AS可能通过介导NONO的表达对AR进行调控。为了验证这个猜想,本文在体外培养睾丸支持细胞基础上,过表达、干扰、荧光定量、western blot等技术对lncRNA LncNONO-AS的功能以及可能存在的调控关系进行验证,得到如下结果:1.通过测序发现了一条新的且组间存在差异的lncRNA LTCONS32868,其靶基因为NONO,通过生物信息学分析我们发现LTCONS32868与NONO存在结合能,且BLAST比对发现lncRNA与其靶基因NONO 99%的序列存在互补。因此,初步推测这条新发现的lncRNA为NONO的反义lncRNA,命名为LncNONO-AS。2.对LncNONO-AS进行过表达处理后其靶基因NONO发生了显著的变化。NONO在过表达组的基因表达量是无处理对照组的1.74倍,差异极显著（P<0.01）。此外,NONO过表达组的蛋白表达量是无处理对照组的1.53倍,差异显著（P<0.05）。表明lncRNA LncNONO-AS对NONO具有调控作用,且可能是正调控作用。3.对LncNONO-AS以及NONO进行RNA pull down实验,结果发现两者之间确实存在结合。表明LncNONO-AS可能是以直接结合的方式调控NONO。4.对LncNONO-AS直接过表达处理后,AR的基因表达量也发生了显著的变化。过表达组AR的基因表达量是无处理对照组的3.48倍,差异极显著（P<0.01）。表明lncRNA LncNONO-AS对AR同样存在调控作用。5.直接干扰NONO发现AR的表达量发生了显著的变化。构建NONO慢病毒干扰载体,分别设置三个干扰组HBLV-NONO shRNA1-GFP-PURO,HBLV-NONO shRNA2-GFP-PURO,HBLV-NONO shRNA3-GFP-PURO。经鉴定HBLV-NONO shRNA1-GFP-PURO干扰组效率最高,可以作为NONO基因的干扰靶点。无处理对照组与HBLV-NONO shRNA1-GFP-PURO干扰组相比,AR的基因表达量由1.01下降为0.34,差异极显著（P<0.01）,蛋白表达量由0.12下降为0.08,下降了33.33%,差异显著（P<0.05）。这些结果表明NONO可以介导AR的表达,且可能是通过正调控作用影响AR的表达量。综合以上结果得出结论,lncRNA LncNONO-AS可通过介导NONO的表达,对AR的表达产生调控作用。这些数据有助于深入了解睾丸发育过程以及生殖过程,为进一步了解lncRNAs的功能提供了许多有价值的信息。