黄体酮和环氧黄体酮微生物羟基转化的研究

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类固醇在临床上被广泛用于抗炎、利尿、雄激素、孕激素、避孕药和抗癌剂。类固醇的羟基化是甾体药物和激素生产中最为重要的一步反应。由于微生物具有较高的区域选择性和立体专一性及环境友好性,常常用于药物中间体的羟基化反应。过去的几十年里,甾体的微生物羟基化反应被广泛研究,以获得新的具有药用活性的羟基类化合物以及揭示羟基类化合物的代谢途径。许多真菌具有在类固醇甾烷母核不同位置进行羟化的能力,然而到目前为止,只有少数微生物的羟基化技术应用到工业生产中,其中11α-、11β-、16α-和17α-羟化具有较高的商业价值,7α-、9α-、14α-、15α-羟基化也具有潜在的工业开发前景。黄体酮是一种临床常用的孕激素类药物,影响排卵、妊娠的建立与维护,并且参与神经元的兴奋性和神经保护方面。有研究表明,11α-OH和11β-OH黄体酮衍生物比黄体酮更能有效地刺激酪氨酸磷酸化。此外,14β-OH黄体酮衍生物是强心甙活性的重要决定因素,可以提高离体心脏肌肉收缩。环氧黄体酮的11β-羟基化产物是一种重要的中间体,用于生产多种抗炎药物,如:氢化可的松、强的松、地塞米松。然而,对环氧黄体酮的微生物羟基化研究不多。本研究使用实验室保存菌种新月弯孢霉(Curvularia lunata)和蓝色犁头霉菌(Absidia coerulea)分别对黄体酮和环氧黄体酮进行发酵转化,转化液经萃取、浓缩,获得产物粗产品,再通过硅胶柱层析分离纯化,共获得7种代谢产物。利用1H NMR、13C NMR、红外光谱、质谱检测等分析技术,对其化学结构进行鉴定,结果表明,黄体酮的转化产物有:7β,11α-羟基孕酮、7β,15α-羟基孕酮、11β,15α-羟基孕酮、14β-羟基孕酮,环氧黄体酮的转化产物有:11β-羟基-16α,17α-环氧孕甾、11β,15α-羟基-16α,17α-环氧孕甾、15β-羟基-16α,17α-环氧孕甾。最后,利用蓝色犁头孢霉菌株(Absidia coerulea)对黄体酮的转化条件进行了研究,最终获得了转化的最优条件。确定其最适发酵条件为:pH6.0,菌龄72h,接种量7%,底物浓度5g/L。在优化条件下缩短了转化的时间,7β,,15α-羟基孕酮转化率达到了90%。
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