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RNA结合基序蛋白3（RNA binding motif protein 3,RBM3）是Danno等于1997年首次在人类胎儿的脑组织中分离鉴定得到的一种富含甘氨酸的冷休克蛋白。RBM3蛋白是一种具有潜在研究价值的多功能蛋白质,它不仅能够在对抗缺氧、寒冷等有害刺激时提升表达量以保护细胞,而且它在预防肿瘤、癌症的发生和肌肉疾病的治疗上都具有开发价值。因此构建能够在细胞内表达的含有RBM3基因的慢病毒表达载体能够为研究RBM3蛋白的生理作用机制及RBM3蛋白在临床上的应用奠定基础。本实验的目的是应用分子生物学手段构建含有仔猪RNA结合基序蛋白3（RBM3）基因的慢病毒表达载体pLenti6/v5-RBM3,通过质粒转染技术让重组的慢病毒质粒进入293T细胞内产毒,用产生的重组慢病毒液感染ST细胞（猪睾丸细胞系）,应用荧光定量PCR方法和Western blot方法从mRNA水平和蛋白水平评价重组慢病毒载体提高RBM3蛋白表达的效果。本研究主要应用生物学手段扩增得到仔猪RBM3基因,然后将其连入入门载体pENTR-11中,应用Gateway技术将RBM3基因平行转移到慢病毒载体pLenti6/v5-DEST中,让重组慢病毒载体pLenti6/v5-RBM3在感受态细胞DH5α中扩增培养,提取质粒pLenti6/v5-RBM3并对连入表达载体的RBM3基因进行测序鉴定,将重组的慢病毒质粒转染293T细胞,收获病毒液,用慢病毒pLenti6/v5-GFP感染ST细胞确定最佳感染复数MOI,根据所测得的最佳MOI值确定感染剂量,然后用慢病毒p Lenti6/v5-DEST的病毒液和重组慢病毒pLenti6/v5-RBM3的病毒液分别感染ST细胞后提取细胞RNA和细胞蛋白样品,用荧光定量PCR方法检测RBM3 mRNA在感染病毒的ST细胞中的表达,用Western blot方法检测RBM3蛋白在感染病毒的ST细胞中的表达。结果表明:（1）构建的慢病毒载体pLenti6/v5-RBM3经测序分析证实基因序列正确。（2）慢病毒载体通过293T细胞包装后的重组慢病毒p Lenti6/v5-RBM3滴度为2×107PFU/mL;慢病毒pLenti6/v5-DEST滴度为4.7×108 PFU/mL;慢病毒pLenti6/v5-GFP滴度为3×108 PFU/mL。（3）荧光定量PCR方法检测到RBM3基因在转录水平上均有表达,空载体组与空白对照组相比,RBM3 mRNA表达量差异不显著;过表达组与空白对照组相比,RBM3 mRNA表达量显著增加,差异显著（P<0.05）。（4）Western blot方法检测到RBM3蛋白在翻译水平均有表达。空载体组与空白对照组相比,RBM3蛋白表达量差异不显著;过表达组与空白对照组相比,RBM3蛋白表达量显著增加,差异显著（P<0.05）。结论:本研究构建的含有重组慢病毒载体pLenti6/v5-RBM3的病毒液能够感染ST细胞,并使其RBM3蛋白表达量显著增加（P<0.05）。