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目的：从麻疯树基因组DNA中克隆麻疯树核糖体失活蛋白(curcin)基因并在大肠杆菌中表达,研究其高效表达及纯化复性条件。研究重组curcin对肿瘤细胞的增殖抑制作用及对肿瘤细胞凋亡的影响。方法：1. curcin基因的获取：从麻疯树幼叶中提取麻疯树总DNA,以其作为模板,采用PCR技术扩增curcin基因片段。2. curcin基因的克隆表达：将扩增curcin基因片段与pET-22b载体连接构建重组载体中,转化到原核表达菌大肠杆菌OB中,筛选重组子。以终浓度0.5 mM IPTG进行诱导表达。3.表达条件优化：通过不同的诱导温度及不同的诱导时间对表达条件进行优化。4.重组curcin蛋白分离纯化：离心收集重组菌体,超声破碎,离心收集包涵体,用2M尿素充分混悬包涵体沉淀,超声洗涤；用8M尿素溶解包涵体；Ni2+柱亲和层析纯化,8M尿素平衡,2M尿素和30mM咪唑与50mM咪唑洗涤,500mM咪唑洗脱；复性液复性；Sphacryl S-100凝胶色谱进一步纯化。5.重组curcin对肿瘤细胞增殖的影响：采用MTT法检测重组蛋白对肿瘤细胞A549、HepG2、MDA-MB-231、CNE-2Z、SPC-A-1、Lewis、hela、smmc-7721、MCF7、SKBR23的增殖抑制作用。6.重组curcin对肿瘤细胞凋亡的影响：重组蛋白处理肿瘤细胞A549,吖啶橙染色后用荧光显微镜观察细胞凋亡情况。结果：1.从麻疯树幼叶中成功提取到基因组总DNA。2.以麻疯树总DNA为模板进行PCR扩增,获得了curicn基因片段,测序结果表明,其序列与GeneBank数据库中收录序列比对,同源率为98.6%。3.成功构建表达curcin重组蛋白的重组质粒pET22b-curcin。重组菌株在30℃下诱导6h后,获得分子量约为29 kDa的重组蛋白curcin,表达量占菌体总蛋白的42%。4.经可溶性检测,curcin重组蛋白以包涵体形式表达。5.通过Ni2+柱亲和层析和Sphacryl S-100凝胶色谱纯化后,重组蛋白纯度达95.6%纯化后目的蛋白得率为27.5mg/L,总回收率为65.6%。6.通过MTT法检测curcin重组蛋白对肿瘤增殖抑制作用,结果显示：curcin重组蛋白对A549、HepG2、Lewis、MDA-MB-231、CNE-2Z、SPC-A-1、MCF7、smmc-7721肿瘤细胞增殖有明显抑制作用,而对hela、SKBR23细胞增殖没有显著抑制作用。细胞凋亡实验显示curcin重组蛋白对A549细胞有明显促凋亡作用。结论：1.从本地麻疯树基因组总DNA中成功分离克隆了curcin基因,并在原核表达系统中获得表达。2.优化了在大肠杆菌中高效表达curcin重组蛋白的条件,建立了包涵体纯化,复性工艺,使纯化后重组蛋白得率达到27.5mg/L3.体外活性实验结果表明,curcin重组蛋白对不同肿瘤细胞增殖抑制作用有差异；细胞凋亡实验检测证实,curcin重组蛋白具有促进肿瘤细胞凋亡的作用。4. curcin重组蛋白在某些种类的肿瘤治疗上具有潜在应用前景。