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目的分析山东省青岛地区妇女不同宫颈病变组织中人乳头瘤病毒16型(HPV16)上游调控区(URR)和E6基因序列多态性,以及序列变异与宫颈病变的相关性。材料与方法[1]2007年8月至2010年7月间自青岛大学医学院附属医院收集宫颈病变标本共374例,其中120例为该院妇产科住院病人手术切除宫颈癌组织,病理诊断107例为宫颈鳞状上皮癌,10例为宫颈腺癌,3例为宫颈腺鳞癌。254例标本是选取门诊病人宫颈液基细胞学涂片异常的宫颈活检标本,其中50例病理诊断为宫颈上皮内瘤变Ⅲ级(Cervical intraepithelial neoplasia, CIN),32例病理诊断为宫颈上皮内瘤变Ⅱ级。[2]采用蛋白酶K法提取新鲜组织标本DNA。[3]以提取的DNA为模板,采用聚合酶链反应(PCR)技术,以通用引物(MY09/11)筛选出感染高危型HPV的宫颈组织标本,然后用HPV16型特异性引物筛选出HPV16阳性标本[4]以HPV16阳性标本DNA为模板,扩增URR和E6基因全序列,将所获得PCR基因产物进行纯化后测序,与德国HPV标准株进行比对分析,寻找HPV16URR和E6的突变位点。结果[1]宫颈癌组、CINⅢ组和CINⅡ组HPV16感染率分别为60.00%(72/120)、43.10%(50/116)和23.19%(32/138),差异有统计学意义(P=0.000)。[2]URR测序结果发现了19个突变位点,所有标本在7521位点均发生了G?A突变；64.22%(70/109)标本中检测到24,7730和7842的联合突变,为另一突变热点。E6测序结果共发现17个突变位点,突变热点为178位点(D25E),其在宫颈癌组、CINⅢ组和CINⅡ组的比例分别为61.11%(44/72)、62.00%(31/50)和50.00%(16/32),三组之间差别无统计学意义(P=0.499)。仅观察到6例350位点突变(L83V)。AS是最多见的突变类型,在154例HPV16阳性标本中占59.09%,其次为E-P原型33.12%。结论[1]HPV16感染与宫颈癌的发生发展密切相关。[2]青岛地区妇女宫颈病变组织中HPV16 URR突变热点为nt7521以及nt24,7830和7842的联合突变。HPV16 E6突变热点为nt178。[3]AS和原型是青岛地区宫颈病变组织中两种主要的HPV16分支。