【摘 要】
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在适应环境变化的过程中,植物进化出高度复杂的防御系统来抵御环境胁迫和生物灾害。WRKY蛋白家族是植物中最大的转录调控因子超家族之一,参与众多植物防御信号通路的调控。WRKY蛋白通过高度保守的WRKY domain与特定的DNA序列TTGAC（C/T）相结合。部分WRKY蛋白能够与VQ蛋白家族成员相互作用,VQ蛋白通过改变自身磷酸化状态激活或抑制WRKY蛋白,进而调节下游基因的转录表达,影响植物相关
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在适应环境变化的过程中,植物进化出高度复杂的防御系统来抵御环境胁迫和生物灾害。WRKY蛋白家族是植物中最大的转录调控因子超家族之一,参与众多植物防御信号通路的调控。WRKY蛋白通过高度保守的WRKY domain与特定的DNA序列TTGAC（C/T）相结合。部分WRKY蛋白能够与VQ蛋白家族成员相互作用,VQ蛋白通过改变自身磷酸化状态激活或抑制WRKY蛋白,进而调节下游基因的转录表达,影响植物相关激素的合成。本文主要对WRKY51蛋白与VQ家族蛋白JAV1的相互作用以及WRKY51蛋白结合核酸的能力进行研究。本文以拟南芥cDNA文库为模板,通过PCR技术扩增WRKY51和JAV1基因,经限制性核酸内切酶酶切、连接等分子克隆技术将目的基因构建在相应载体,在大肠杆菌细胞进行蛋白表达。我们根据序列比对结果设计了 WRKY51的WRKY domain以及JAV1（1-85）克隆,通过亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等纯化技术获得了纯度较高、性质稳定的蛋白样品。Pull Down实验表明,WRKY51与JAV1蛋白间存在相互作用;凝胶迁移实验（EMSA）表明WRKY51 WRKY domain具备和W box DNA结合的能力。我们同时制备了 WRKY51和W box DNA的复合物,进行蛋白结晶实验,初步获得了 WRKY51（95-170）-DNA复合物晶体。
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